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目的:
观察PFOS对E15大鼠大脑皮层神经干细胞增殖和发育调控基因Notch1、Sox2、Stat3和P21表达的影响,探讨PFOS影响皮层神经干细胞增殖机制。
方法:
1、分离E15天SD大鼠皮层进行神经干细胞原代培养。以(1-2)*106/ml细胞密度接种,在含有2% B27,20ng/ml bFGF,20ng/ml EGF的DMEM/F12的培养基中培养,并稳定传至第三代。用nestin细胞免疫化学染色法鉴定神经干细胞。
2、将原代培养的神经干细胞随机分为5组:空白组(C组),溶剂对照组(D组),10μM PFOS组(P1组),50μM PFOS组(P2组),100μM PFOS组(P3组)。D组中加入DMSO,P1,P2,P3中各加入10μM,50μM,100μM PFOS,放入培养箱中继续培养。
3、增殖实验在培养20小时后,加入10μM的EDU,继续培养4小时后进行EDU免疫荧光染色。
4、培养24小时后采用荧光实时定量聚合酶链反应法(Real-Time PCR)检测各组样本中Stat3、Notch1、Sox2和P21mRNA的含量。
结果:
1、与C组相比,D组与P1组对神经干细胞增殖没有抑制作用,P2组、P3组对神经干细胞均产生抑制作用,差异有统计学意义(P<0.01)。
2、与C组比较,D组、P1组、P2组和P3组的Stat3、Notch1、Sox2和P21 mRNA含量均无明显改变,差异无统计学意义。
结论:
全氟辛烷磺酸对神经干细胞增殖有抑制作用,但对调控基因Stat3、Notch1、Sox2和P21表达没有影响。