目的研究不同病程阶段的脓毒症对非去极化肌松剂（Non-depolarizing neuromuscular block agents，NMBA）量效及时效的影响；从神经肌接头（Neuromuscular junction，NMJ）突触后膜烟碱型乙酰胆碱受体（Nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）的异质化探讨脓毒症导致NMBA药理学变化的发生机制；验证乌司他丁改善NMBA药效作用的有效性以及对NMJ突触后nAChR异质化的作用。方法第一部分选择健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠66只，鼠龄2~3月，体重200~220g，随机分为正常组（Normal组，n=6）、假手术组（Sham组，n=6）以及脓毒症组（Sepsis组）。Normal组大鼠不予任何处理。Sham组大鼠仅行开腹盲肠探查，不予盲肠结扎。Sepsis组大鼠通过盲肠结扎穿孔术（Cecal ligation and puncture，CLP）构建脓毒症模型。在建模（Sepsis组）或手术（Sham组）后第1天（Day1组，n=6）、第3天（Day3组，n=6）、第7天（Day7组：Sham组中n=6，Sepsis组中n=12）以及第14天（Day14组：Sham组中n=6，Sepsis组中n=12）进行指标检测和标本采集。按剂量累计法给予非去极化肌松剂维库溴铵（初始剂量为0.05mg/kg，以0.05mg/kg为递增剂量，最大剂量达到1mg/kg）。以0.1Hz频率刺激坐骨神经，检测单次肌颤搐收缩力，计算维库溴铵的最大单次肌颤搐抑制百分率（%），以相应药物剂量拟合量效曲线。通过软件得到维库溴铵的半数有效抑制浓度（IC50）和95%有效抑制浓度（IC95）。最后单次给予2×IC95的维库溴铵，记录药物起效时间、维持时间以及恢复时间。第二部分选择健康成年雄性SD大鼠60只，鼠龄2~3月，体重200~220g，随机分为Sham组以及Sepsis组。Sepsis组大鼠通过CLP构建脓毒症模型。Sham组大鼠仅行开腹盲肠探查术，不予盲肠结扎。各组分别在建模后1天（Day1组，n=6）、3天（Day3组，n=6）、7天（Day7组，Sham组中n=6，Sepsis组中n=12）以及14天（Day7组，Sham组中n=6，Sepsis组中n=12）进行指标检测和标本采集。各组大鼠分别在建模或手术前、后检测胫前肌复合肌动作电位（Compound muscle actionpotential，CMAP），测定其波幅和时程，计算运动神经传导速度（Motornerve conduction velocity，MCV），同时测定单次肌颤搐收缩力。取大鼠胫前肌组织，运用免疫组化和免疫荧光法测定γ-nAChR和7-nAChR在骨骼肌细胞膜上的表达和分布；通过western-blot测定这两种蛋白表达量；采用RT-PCR法测定γ和7功能亚基mRNA的表达水平；取L4~L5节段脊髓前角神经组织，通过western-blot测定neuregulin-1蛋白表达量。第三部分选择健康成年雄性SD大鼠24只，鼠龄2~3月，体重200~220g，随机分为生理盐水对照组（0.9%N.S组，n=12）和乌司他丁组（Ulinastatin组，n=12）。各组大鼠通过CLP构建脓毒症模型，在建模后第10天静脉给予乌司他丁5000u/kg（Ulinastatin组）或给予等容量0.9%N.S（0.9%N.S组），每天1次，连续3天。各组大鼠在建模后第14天进行指标检测和标本采集。维库溴铵药效学研究方法同实验第一部分。神经电生理检测和蛋白检测检测同实验第二部分。结果第一部分（1） Sham组各亚组维库溴铵IC50与Normal组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组中，Day1组维库溴铵IC50与Normal组和Sham组比较，差异无统计学意义（P>0.05）,其余各组与Normal组和Sham组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。Sham组各亚组之间比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组各亚组之间比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；Sepsis组和Sham组在建模/手术后同一时间的亚组比较，除Day1组差异无统计学意义（P>0.05），其余各组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。（2） Normal组与Sham组各亚组的起效时间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sham组各亚组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组中，Day1组维库溴铵起效时间与Normal组比较，差异无统计学意义（P>0.05），其余各组与Normal组比较，差异均有统计学差异（P<0.05）。在建模后同一时间组比较，Sepsis组的Day1组和Sham组的Day1组差异无统计学意义（P>0.05），其余时间组比较，差异均有统计学差异（P<0.05）。Normal组与Sham组各亚组的维持时间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sham组各亚组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组中，Day1组维库溴铵维持时间与Normal组比较，差异无统计学意义（P>0.05），其余各组与Normal组比较，差异均有统计学差异（P<0.05）。在建模后同一时间组比较，Sepsis组和Sham组的维持时间在Day1差异无统计学意义（P>0.05），其余时间组比较，差异均有统计学差异（P<0.05）。Normal组与Sham组各亚组的恢复时间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sham组各亚组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组中，Day1组维库溴铵恢复时间与Normal组比较，差异无统计学意义（P>0.05），其余各组与Normal组比较，差异均有统计学差异（P<0.05）。在建模后同一时间组比较，Sepsis组和Sham组的恢复时间在Day1差异无统计学意义（P>0.05），其余时间组比较，差异均有统计学差异（P<0.05）。第二部分（1） Sham组各亚组的CMAP幅值比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组各亚组的CMAP幅值比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Day1组幅值最高，Day14组CMAP幅值最低。Sepsis组和Sham组在建模后同一时间组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Sham组各亚组的CMAP时程比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组各亚组的CMAP时程比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Day14组时程最长，Day1组CMAP时程最短。Sepsis组和Sham组在建模后同一时间组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Sham组各亚组的MCV比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组各亚组的CMAP幅值比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Day1组MCV最高，Day14组MCV最低。Sepsis组和Sham组在建模后同一时间组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）Sham组各亚组的肌颤搐收缩力比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Sepsis组各亚组的肌颤搐收缩力比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Day1组肌颤搐收缩力最高，Day14组肌颤搐收缩力最低。Sepsis组和Sham组在建模后同一时间组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）与Sham组比较，脓毒症Day1、Day3、Day7以及Day14组的大鼠骨骼肌γ-nAChR蛋白表达逐渐增高；在脓毒症建模后14天，γ-nAChR蛋白表达最高，差异有统计学意义（P<0.05）。γ-nAChR蛋白分布于骨骼肌细胞膜上。γ-nAChR功能亚基γ亚基mRNA表达的变化趋势与蛋白表达变化趋势一致。与Sham组比较，脓毒症Day1、Day3、Day7以及Day14的大鼠骨骼肌7-nAChR蛋白表达逐渐增高；在脓毒症建模后14天，7-nAChR蛋白表达最高，差异有统计学意义（P<0.05）。7-nAChR功能亚基7亚基mRNA表达的变化趋势与蛋白表达变化趋势一致。（4）与Sham组比较，Sepsis组各组的大鼠骨骼肌终板膜增高；脓毒症Day1、Day3、Day7以及Day14组的大鼠骨骼肌终板膜比较，差异有统计学意义（P<0.05）。随着脓毒症模型建模时间越长，终板膜的面积逐渐增加。（5）与Sham组比较，脓毒症Day1、Day3、Day7以及Day14组的大鼠脊髓背角神经元的neuregulin-1蛋白表达降低；在脓毒症建模后14天，neuregulin-1蛋白表达达到最低，差异有统计学意义（P<0.05）。随着脓毒症模型建模时间越长，neuregulin-1蛋白表达逐渐降低。第三部分（1）Ulinastatin组大鼠胫前肌CMAP的幅值和神经传导速度与0.9%N.S组大鼠比较，差异有统计学意义（P<0.05），而时程比较，两组差异无统计学意义（P>0.05）。（2） Ulinastatin组大鼠胫前肌单次肌颤搐收缩力高于0.9%N.S组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）与0.9%N.S组比较，Ulinastatin组大鼠胫前肌γ-nAChR蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。同样，Ulinastatin组大鼠胫前肌γ-nAChR功能亚基γ mRNA表达水平低于0.9%N.S组（P<0.05）。与0.9%N.S组比较，Ulinastatin组大鼠胫前肌7-nAChR蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。Ulinastatin组大鼠胫前肌7-nAChR功能亚基7mRNA表达水平低于0.9%N.S组（P<0.05）。（4）与0.9%N.S组比较，Ulinastatin组大鼠脊髓背角神经元neuregulin-1蛋白表达增高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论（1）脓毒症导致骨骼肌对非去极化肌松剂敏感性下降，表现为肌松作用下降，肌松起效时间延长，维持时间和恢复时间缩短。同时，脓毒症导致神经肌肉功能障碍，骨骼肌收缩力下降，复合肌动作电位幅值降低，神经传导速度减慢，发生脱髓鞘改变；（2）脓毒症导致骨骼肌细胞膜上胎儿型乙酰胆碱受体γ-nAChR和神经型乙酰胆碱受体7-nAChR表达升高，并分布于骨骼肌整个细胞膜。脓毒症的非去极化肌松剂的肌松作用下降与这两种非成熟型nAChR受体的表达有关；（3）蛋白酶抑制剂乌司他丁可抑制脓毒症导致的骨骼肌细胞膜上γ-nAChR和7-nAChR的表达上调，促进神经肌肉功能的恢复，改善骨骼肌对非去极化肌松剂的敏感性