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本实验结合国内开展的相关科研项目进行了猪内源性反转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前期研究工作,现分述如下: 1.巴马小型猪中内源性反转录病毒的存在与表达。应用PCR和RT-PCR的方法,对来源于巴马小型猪外周血淋巴细胞(PBL)的DNA和RNA样品进行了系统的检测。结果表明,在所有被检样品中均有PERV前病毒的存在,且存在于基因组中的前病毒均能以mRNA的形式进行表达。 2.PERV体外感染人HEK293细胞模型的建立。应用猪淋巴细胞和G418抗性293细胞共培养、经G418加压筛选的方法成功地建立了PERV感染HEK293细胞的模型。这一感染模型的成功建立,为今后的研究工作提供了一个极好的实验平台。 3.巴马小型猪来源的PERV囊膜基因的克隆与序列测序。应用RT-PCR的方法从巴马小型猪外周血淋巴细胞RNA样品中钓取了PERV-env基因,并克隆至pGEM-T Easy载体。序列测定表明,该克隆片段由2013bp组成,编码671个氨基酸。 综上所述,本课题的研究工作已具有良好基础,为进一步深入研究PERV创造了条件。