共轭亚油酸具有抗动脉粥样硬化、抗癌、减肥等一系列保健功效,成为近年来的研究热点。亚油酸异构酶是生成共轭亚油酸过程中非常重要的酶。利用天然产酶的微生物或天然的酶催化存在操作过程复杂、不易得到酶,且酶活较低、不稳定的缺点。本试验通过构建乳酸克鲁维酵母工程菌大量的表达重组亚油酸异构酶,并通过微囊化的手段,提高酶活及酶的稳定性,为利用亚油酸异构酶工业化生产共轭亚油酸奠定基础。通过PCR扩增得到植物乳杆菌P-8来源的亚油酸异构酶基因,连接至表达载体pKLAC1上,转化至乳酸克鲁维酵母菌CICC中后,进行优化表达重组亚油酸异构酶,分离发酵液经盐析、Sephadex G-100层析后,制得亚油酸异构酶,经海藻酸钠和聚电解质微囊化后,比较两者的酶活力、热稳定性及酸碱稳定性。经菌落PCR、双酶切鉴定、测序鉴定,成功构建了表达了亚油酸异构酶的酵母基因工程菌。最佳表达条件为：时间4 d,温度25℃,pH为5,培养基碳源为乳糖,接种量为5%,装瓶量90mL (250 mL三角瓶),摇床转速设定在200r/min,发酵液的酶活为3.43±0.12×103U/mL,发酵液盐析、Sephadex G-100层析后经SDS-PAGE为单一条带,酶活为9.10±0.01×103U/mL。纯化后的亚油酸异构酶制得海藻酸钠微囊和聚电解质微胶囊。海藻酸钠微囊比活力为1.74±0.08×103U/mg,聚电解质微胶囊比活力为2.14±0.10×103U/mg;聚电解质微胶囊酶活较高。海藻酸钠微囊在20～40℃稳定,聚电解质微胶囊在20-50℃稳定。海藻酸钠微囊在pH=4-5稳定,聚电解质微胶囊在pH=4-5稳定。两种微囊的稳定性均有所提高,但聚电解质微囊的效果更好。