水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)引起的水稻条纹叶枯病是最重要的水稻病毒病之一,给我国水稻生产安全造成了巨大威胁。为了创制高抗RSV的水稻新种质,本研究首先根据天然microRNA (miRNA)的结构特点和作用原理,针对水稻条纹叶枯病毒基因组设计了人工miRNA(artificial microRNA, amiRNA),同时克隆了miRNA528基因的前体(pre-miRNA)。应用重叠PCR (over-lapping)技术并以这个水稻天然miRNA前体作为骨架,构建2个水稻转化载体(pAmiR-1和pAmiR-2),其中载体pAmiR-1是针对RSV p3基因；载体pAmiR-2是针对RSV pc3基因。通过农杆菌介导法将2个人工miRNA表达载体导入水稻品种武育粳3号,分子鉴定表明共获得219株转基因水稻植株。利用携带RSV的介体灰飞虱(Laodelphax striatellus, Fallen)对部分转基因株系进行抗病毒鉴定,结果表明共有22个转基因水稻株系表现为高抗。进一步通过实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)分析表明所设计构建的人工miRNA高效大量表达。