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乳腺癌在女性肿瘤中发病率较高,患者死亡的主要原因是肿瘤发生转移。研究发现,紧密连接蛋白claudins(CLDNs)的表达异常能影响紧密连接(tight junctions,TJs)的结构和功能,并通过某些信号通路参与细胞信号转导,进而在肿瘤转移过程中发挥作用。本课题组在前期工作中发现,乳腺癌细胞MCF-7中CLDN6低表达,过表达CLDN6能抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭。为了探讨CLDN6的作用机制,我们利用基因芯片技术筛查和分析CLDN6的靶基因及相关的信号通路,结果表明,CLDN6过表达后MCF-7细胞的JAKs/STATs信号通路中JAK2、STAT3等表达上调。JAKs/STATs信号通路是细胞因子、趋化因子和生长因子受体下游最主要的信号通路,参与细胞生长、增殖、迁移及侵袭等生物过程。因此,我们推测CLDN6可能直接或间接地激活JAK2/STAT3信号通路,从而发挥抑制MCF-7细胞迁移和侵袭的作用。但其具体作用机制目前尚不清楚。目的:探讨紧密连接蛋白CLDN6通过JAK2/STAT3信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7迁移和侵袭的作用,为乳腺癌的治疗提供新的靶点。方法:以前期工作中所获得的稳定表达CLDN6的MCF-7细胞(克隆组)和转染空载pcDNA3.1质粒的MCF-7细胞(空载组)为研究对象。1.RT-PCR及Western-Blot技术检测CLDN6的表达。2.Western-Blot技术检测JAK2、STAT3、p-JAK2和p-STAT3的表达。3.iCelligence实时细胞功能分析仪检测JAK2特异性抑制剂AG490对克隆组细胞作用的IC50值。4.Western-Blot技术检测AG490抑制克隆组细胞JAK2激活的最佳作用浓度和时间。5.细胞划痕和transwell小室实验检测AG490对细胞迁移和侵袭的影响。6.Western-Blot技术检测AG490对E-cadherin和Vimentin表达的影响。结果:1.RT-PCR和Western-Blot结果显示,克隆组CLDN6的RNA和蛋白均明显高于空载组(P<0.01)。2.Western-Blot结果显示,克隆组p-JAK2和p-STAT3表达明显高于空载组(P<0.05)。3.AG490对克隆组细胞作用的IC50为189μM。4.AG490对克隆组细胞JAK2抑制的最佳作用浓度为50μM(P<0.01),最佳作用时间为24h(P<0.01)。5.细胞划痕实验结果显示,AG490明显增强克隆组细胞的迁移能力(P<0.05);Transwell小室实验结果显示,AG490明显增强克隆组细胞的侵袭能力(P<0.05)。6.Western-Blot结果显示,AG490处理克隆组细胞后,上皮细胞标志物Ecadherin表达明显下调(P<0.01),而间质细胞标志物Vimentin的表达明显上调(P<0.01)。结论:CLDN6通过激活JAK2/STAT3信号通路抑制乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,并抑制其迁移和侵袭。