【摘 要】
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猪星状病毒（Porcine Astrovirus,PAstV）是一种可以引起猪病毒性腹泻的单股、正链RNA病毒。PAstVs在全世界的猪群中普遍存在,据报道目前PAstV有5种基因型在中国传播。研究发现,猪星状病毒3型（PAstV 3）不仅能够引起猪腹泻,而且还是引起猪脑脊髓炎的原因之一。与此同时,我们对PAstV的混合感染情况也知之甚少,根据宿主和病毒基因型的不同,疾病的范围可以从无症状到脑炎不
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猪星状病毒（Porcine Astrovirus,PAstV）是一种可以引起猪病毒性腹泻的单股、正链RNA病毒。PAstVs在全世界的猪群中普遍存在,据报道目前PAstV有5种基因型在中国传播。研究发现,猪星状病毒3型（PAstV 3）不仅能够引起猪腹泻,而且还是引起猪脑脊髓炎的原因之一。与此同时,我们对PAstV的混合感染情况也知之甚少,根据宿主和病毒基因型的不同,疾病的范围可以从无症状到脑炎不等,但由于毒株之间频繁的重组事件,PAstV具有高度的遗传变异性,可以在不同的宿主物种之间传播。虽然这种传播的方式和过程尚不清楚,但是越来越多的证据表明重组事件会导致跨物种传播。基于此,本研究建立了PAstV 3型TaqMan荧光定量PCR的检测方法以及PAstV多重RT-PCR的检测方法,并对广西地区猪星状病毒的流行情况进行监测,具体结果如下:1.猪星状病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用为了建立特异性、敏感性及快速的PAstV 3检测方法并应用于临床检测,根据Gen Bank检索的PAstV 3参考序列,在ORF1b保守区设计特异性引物和TaqMan探针;经过反复的条件和体系优化,对建立的实时荧光定量RT-PCR方法进行敏感性、特异性测定并初步应用于临床粪便样品检测。结果显示,该方法标准曲线呈良好的线性关系,R~2值可达0.997;与多种常见的猪病病毒均无交叉反应,特异性良好。与常规PCR相比,该检测方法敏感性是常规PCR方法的100倍,敏感性高;批内、批间重复性试验的变异系数均不足2.0%,重复性良好。使用该方法对临床收集的30份疑似PAstV3粪便样本进行检测,检测阳性率为40%,检出率高于常规PCR方法。2.猪星状病毒多重RT-PCR方法的建立目前针对猪星状病毒的检测方法主要通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的一般方法为主。为了对5种不同基因型的PAstVs进行鉴别,本研究建立了基于PAstV 1型ORF 2基因和PAstV 2~5型ORF1ab基因的多重RT-PCR方法。通过对多重RT-PCR检测的敏感性、特异性的优化,建立了多重RT-PCR的检测方法。2019年4月至2020年11月期间,从中国广西各个地区采集的共275份粪便样本均采用新建立的多重RT-PCR进行检测。结果显示,PAstV 1~5各基因型的阳性率分别为11.2%（31/275）、17.8%（49/275）、13.1%（36/275）、14.9%（41/275）和8%（22/275）,同时还存在双重感染0.72%（2/275）,甚至是三重感染0.36%（1/275）现象。试验结果表明,该方法能快速、敏感、准确对临床样本进行检测,说明本研究建立的多重RT-PCR方法特异性和敏感性高,具有很好的临床应用价值。同时,利用已经建立的检测方法对广西地区猪星状病毒的流行情况进行调查,为未来相关疾病的预防和控制提供了技术支持。
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