【摘 要】
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许多研究已经发现美洲商陆抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein,PAP)可以抗多种植物病毒侵染,具有广谱的抗病毒特性,因此可以利用PAP来防治植物病毒的危害.在该实验室已有
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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许多研究已经发现美洲商陆抗病毒蛋白(Pokeweed antiviral protein,PAP)可以抗多种植物病毒侵染,具有广谱的抗病毒特性,因此可以利用PAP来防治植物病毒的危害.在该实验室已有的研究基础上,探索了重组巴斯德毕赤酵母菌在摇瓶中发酵制备PAP抗病毒制剂的可行性,同时采用基因工程的方法,利用农杆菌介导转化缺失型PAP基因,获得了转基因矮牵牛植株.整个试验过程包括两个部分:第一部分筛选出表达外源PAP量较高的甲醇利用快速型重组巴斯德毕赤酵母菌(Mut+)菌株.摸索了碳源、接种比例、甲醇诱导浓度、培养基pH值、生物素浓度、摇床转速、诱导时间等培养条件对重组巴斯德毕赤酵母菌表达PAP的影响.通过优化组合分析,确立了摇瓶发酵方案.SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测结果表明,PAP在摇瓶发酵中的表达量可达45mg/L,抗病毒生物测定显示发酵PAP产物对烟草花叶病毒(TMV)抑制效果明显,为进一步大规模发酵表达PAP打下基础.第二部分是农杆菌介导PAP基因转化矮牵牛的试验.首先通过冻融法将含有PAP基因的重组表达载体pBI121转入土壤农杆菌LBA4404中,然后采用叶盘法在农杆菌的介导下转化矮牵牛"粉垂吊"品种.通过抗性筛选和PCR检测获得了转PAP基因的矮牵牛植株.该部分研究为矮牵牛花卉抗病毒工作和进一步向矮牵牛导入其他工程基因的研究积累了基础.
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