【目的】间充质干细胞对组织修复及再生具有重要作用,局部干细胞的衰老及枯竭是器官及组织老化的重要原因。补充干细胞可以缓解器官或组织局部的老化及功能障碍,因此干细胞治疗成为补充局部器官或组织干细胞的一种可行性方法。然而脂肪来源干细胞移植存在老化及低存活率等缺点。这其中最主要的原因是移植部位的炎症反应及氧化应激反应,脂肪来源干细胞对活性氧较为敏感,然而内源性的活性氧却是重要的分子信号,高水平的活性氧能引起细胞功能障碍及死亡,而SIRT1在氧化应激中扮演重要的角色。本研究观察间充质细胞的干细胞特性、不同浓度双氧水对间充质细胞的作用及SIRT1在其中的作用方式及机制。【方法】1、从人体脂肪组织中提取脂肪来源间充质干细胞。观察干细胞的形态、贴壁及增殖特性。利用流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标志,三系分化实验鉴定间充质干细胞。2、不同浓度双氧水作用于脂肪来源间充质干细胞,观察不同浓度双氧水对细胞的影响。CCK-8、流式凋亡细胞术及TUNEL实验观察不同浓度双氧水对间充质细胞活力及凋亡情况的影响,β-半乳糖苷酶染色实验观察不同浓度双氧水对间充质细胞衰老的影响,自噬相关的蛋白、p53相关的凋亡通路及RNA表达水平通过Western blot及PCR实验证实。3、观察SIRT1对间充质干细胞的自噬水平、衰老及凋亡的影响,通过Western blot实验检测抑制或激活SIRT1后,自噬相关蛋白的变化、p53相关的凋亡通路的变化。CO-IP实验用来证实SIRT1与p53蛋白之间的相互作用的方式。【结果】1、提取的脂肪来源干细胞纯度较高,2、不同浓度双氧水作用于脂肪来源间充质干细胞后会产生不同的影响。CCK-8、流式凋亡细胞术及TUNEL实验显示较低浓度的双氧水可以促进间充质干细胞的增殖,较高浓度的双氧水促进细胞死亡,并且随着双氧水浓度的提高,p53、p21、C-caspase3等蛋白水平升高。3、最后CO-IP实验证实SIRT1与p53蛋白之间的相互作用,SIRT1通过去乙酰化作用使p53去乙酰化,去乙酰化位点易于结合泛素,从而易于降解。【结论】1、从脂肪组织中提取的间充质细胞具有多向分化潜能,干细胞纯度高。2、不同浓度双氧水对细胞产生不同影响,低浓度双氧水能够促进脂肪干细胞增殖,通过激活SIRT1增加自噬水平逆转脂肪干细胞的衰老,高浓度双氧水促进细胞凋亡。3、双氧水还能够以剂量依赖性方式增加SIRT1蛋白和自噬水平。4、SIRT1能够通过去乙酰化的方式促进p53降解。