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目的 脑缺血在临床上很常见，多发生于心肌梗塞、休克、窒息以及一些外科手术等造成的脑部血液低灌注。脑缺血一定时间后，即使恢复灌注，往往已发生不可逆的组织损伤。而恢复灌注后还存在着再灌注造成的损伤。海马等缺血损伤敏感区易发生迟发性神经元死亡（delayed neuronal death，DND）。 脑缺血／再灌注损伤（cerebral ischemia／reperfusion injury，CI／RI）是由多种相互联系的原因造成的：细胞外兴奋性氨基酸的过度积累，细胞内Ca2+的增加以及氧化应激。这些原因又促成了能够损伤蛋白质、脂质和DNA的活性氧的生成。根据细胞损伤的程度，细胞或采取修复、保护机制，或经历坏死和凋亡而死亡。 对CI／RI后神经细胞的保护方面的研究是目前医学研究的热点之一，除传统的药物疗法和低温疗法外，现在研究较多的是缺血预适应，即在预想可能发生的脑缺血之前给予一次短暂缺血进行预适应，但在临床应用中尚不实际；而化学性预适应由于预适应物质的毒性而限制了其应用价值。 星状神经节阻滞（stellate ganglion block，SGB）可以调节神经系统、内分泌系统与免疫系统的功能，临床上SGB除广泛用于疼痛性疾病的治疗外，也用于一些非疼痛性疾病的治疗，并取得了相当的疗效。但迄今为止，有关SGB对CI／RI的防治作用，国内外尚无报道。文献报道大鼠颈交感神经干离断（transection of cervical sympathetic trunk，TCST）可以模拟人的SGB，大鼠TCST后表现出的持续眼裂狭小与人的SGB后的眼睑下垂相一致，长期反复的SGB可产生与TCST同样的效果。因此，我们设计了以下的系列研究：以大鼠的TCST来模拟人类的SGB，从器官、组织和分子水平探讨其对CI／RI的防治作用及作用机制，为临床防治缺血、缺氧脑病的进一步研究提供实验基础。 方 法 一、动物、试剂与仪器设备 ＊实验动物：Wistar大鼠 60只，体重 2009－3009，雌雄不拘，由中国医科大学实验动物中心提供。 2．主要试剂与仪器：戊巴比妥钠，盐酸布比卡因注射液，盐酸普鲁卡因注射液，MAPZ、NF－KB一抗及SP免疫组化试剂盒，ET人GRP＊L－8放免试剂盒，RT－PCR试剂盒，ICAM叫内参照的引物，RNA裂解液，其它分析纯试剂等。A－200Ds型电子天平，DuPont ST－ZI型低温离心机，pC－100型PCR扩增仪，Kodak ID型凝胶呈像分析系统人IS－700D型数码凝胶扫描分析系统，DYY－皿 31A型电泳仪，5500P紫外光、可见光连续分光光谱仪，RM－6000多导生理检测仪，NIHON电磁血流仪，OlymPus显微镜，JUNG－CM1800型切片机，OppON－EM10C透射电镜，LKB－V型超薄切片机，HEIDOLPH DIAX900匀浆机，SN682型放射免疫v自动记数仪，OlymPus AX70显微摄像系统，MetaMorptwolympus DP10／BX50显微图象分析系统，B－Brown微量泵，解剖显微镜，小动物手术器械等。 二、动物模型、分组及取材： 1．采用随机对照方法，将 60只大鼠分为三组：对照组u组，n ＝＝ 4八上I／RI组＊组，n＝28)；TCST组 ＊组，n＝28)。B组和 C组再各均分为再灌注 oh、lh、3h、24h／8h、72h和 96h七个亚组。A组只进行手术操作，不夹闭、不烧灼、不离断出组和C组则按经典的四动脉阻断法制成大鼠全脑CVRI模型：灼断双侧椎动脉，无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉(CA乃0ndn，去除夹闭，恢复脑血流人组在显微镜下于右侧CA分叉处的背侧面找到颈上神经节，距其下3rum离断右侧颈交感神经干(夹闭双侧CA前smin离断L将断端结扎。 各组在相应时点再麻醉(对照组约为麻醉后60minX处死前右侧股动脉插管测定平均动脉压，测定双侧 CA的血流；由颈动脉取血 SInl，4t3000rpln／min离心15min后，取上清－20℃以下保存待测；经心脏升主动脉灌注固定液后，断头取脑，取前部皮层组织一块，液氮中速冻后，放人－70℃冰箱内待测。其余脑4T下继续固定24h待测。A组在3组、B4组小6组、 ·2·C3组人4组和 C6组电镜取材在灌注固定后分别取 IInln3大小海马 CA区组织放人3％磷酸缓冲的戊二醛中固定。 三、观察指标及方法： 1．一般状态：观察处死前大鼠的状态，包括活动、饮食和眼裂的变化。 L血压和血流：处死前测定平均动脉压（MAP，mmHg入双侧CA的PUDeE（IllHmin）和 MEAN（ml／min人（多导生理检测仪和血流仪） 3．HE染色观察大鼠的脑组织形态学改变。 4．电镜下观察大鼠的脑细胞超微结构的变化。 以上各指标只在 A组，B3组，B4组，B6组，C3组，C4组和 C6组中观察。 5．放免法测定血浆内皮素ur入降钙素基因相关肽＊GRP）含量，并计算 ET／CGRP比值。 6．放免法测定血浆白细胞介素－8OLJ）含量。 7．RT－PCR法检测脑组织细胞间粘附分子－1（ICA－l）mRNA的表达。 8．免疫组化SP法检测脑组织微管相关蛋白2（MAfu）和核转录因子－KB（NF－KB）的蛋白表达。（A、BI、BZ、B3、B4、B6、CI、CZ、C3、C4和C6组） 四、统计学处理： 结