背景RNA降解复合体是RNA在生物体内更新的主要工具。PNPase通过的3′到5′核酸外切酶降解RNA。RraA是RNA降解复合体降解RNA过程中的重要抑制因子。鞭毛是细菌的重要成分也是致病因子之一,鞭毛的组装是一个多蛋白质参与的复杂的过程。前期研究中成功解析了鞭毛FlgD蛋白质结构和纯化了RNase E抑制因子。通过对PNPase和RraA结构研究更能揭示RNA降解及其调节过程,通过对FliD结构研究进一步了解鞭毛的组装机制。目的本研究将对蛋白质PNPase、RraA和FliD纯化,得到这三个蛋白质的蛋白质晶体,收集X-光衍射数据并解析他们的三维结构。方法运用相关数据库对目的蛋白质进行生物信息学的分析,通过分子克隆技术,克隆、表达、纯化大量的纯度大于95%的绿脓杆菌RNA降解酶PNPase蛋白质、绿脓杆菌RNase E抑制因子RraA蛋白质和FliD蛋白质。用凝胶层析法检测目的蛋白质在溶液中的聚集状态。用晶体筛选试剂盒对目的蛋白质筛选蛋白质晶体,并对初步得到的晶体进行优化,以获得高质量的晶体。用X衍射仪收集到得到蛋白质晶体的衍射数据。通过Pull-down方法验证了PNPase和RNase E的相互作用,并纯化出该复合物用于晶体筛选。结果通过分子克隆的技术,成功克隆、表达、纯化了绿脓杆菌PNPase、RNase E和RraA蛋白质,和肠沙门氏菌鞭毛帽FliD蛋白质。PNPase、RraA和FliD过分子筛Superdex 200中显示在溶液中它们分别主要以六聚体、六聚体和多种聚集状态存在。通过Pull-down技术成功获得大量的PNPase-RNase E复合物。通过筛选和优化得到了晶体质量比较好的晶体,并且成功收取PNPase和RraA蛋白质晶体的X-衍射数据,而FliD由于晶体分辨率低未能收到完整衍射数据。成功解析了RraA蛋白质的三维结构,PNPase结构正在修正中。