预防奶牛乳房炎地榆膜剂的研制及其家兔模型效果研究

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本试验对采自患有临床型乳房炎病牛的乳样进行了细菌的分离与鉴定。首先将乳样分别用麦康凯培养基,伊红美蓝培养基和绵羊鲜血培养基进行培养。然后,取典型特征的菌落镜检观察,将疑似大肠杆菌菌落接种在伊红美蓝培养基上,将疑似金黄色葡萄球菌和无乳链球菌菌落接种在绵羊鲜血培养基上,进行细菌的纯培养。最后,通过生化试验对分离的疑似菌株进行鉴定,最终确定该乳样中含有大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和无乳链球菌3种主要致病菌。采用固体培养基连续稀释法,进一步研究了地榆、金银花、山银花和黄芩4味中药对3种奶牛乳房炎主要病原菌的抑菌情况。经试验发现,4种中药水煎液对大肠杆菌的抑菌活性依次为:黄芩>地榆>山银花>金银花;对金黄色葡萄球菌的抑菌活性为:地榆>黄芩>山银花>金银花;对无乳链球菌的抑菌活性为:地榆=黄芩>金银花>山银花。根据体外抑菌试验结果,结合药物价格以及是否便于制剂,最终确定以单味中药地榆为入方中药。然后通过纸片扩散法,测定不同浓度的地榆水煎液对3种乳房致病菌的抑菌效果,确定了地榆最佳入方浓度为0.25g/ml,最后按照一定的制膜工艺制成膜剂。为评价该中药膜剂乳头外用的安全性,用家兔进行了皮肤刺激性试验和皮肤过敏性试验研究。结果发现,受试中药膜剂,对家兔完整皮肤和破损皮肤均没有刺激性和致敏性,刺激性指数<0.5,过敏指数为0。说明该中药膜剂是安全无毒无刺激性的。为了评价受试膜剂一旦进入奶中被食用的安全性,用昆明小鼠分别进行了急性毒性和亚慢性毒性试验的研究。急性毒性结果表明,给小鼠最大灌服100mL/kg原药液,小鼠仍未见异常。根据《保健食品安全性毒理学评价程序和方法》中规定的急性毒性分级来看,受试中药膜剂的LD50远远大于21.50g/kgBW,应属于无毒物。亚慢性毒性试验结果显示,在长达90d的试验过程中,受试中药膜剂的三个剂量组小鼠的临床表现、脏器指数、血常规、血液生化指标以及组织病理学特征均与对照组无显著差异(P>0.05),表明该制剂即使长期大剂量进入奶中被食用也是安全的。为了进一步评价该中药膜剂预防乳房炎的效果,将泌乳家兔随机分为试验组、不用药对照组和空白对照组。试验组家兔挤乳后,乳头先蘸取中药膜剂,再接触菌液;不用药对照组家兔挤乳后乳头直接接触菌液;空白组挤乳后直接接触生理盐水。一周后发现不用药对照组家兔精神萎靡,背毛杂乱,乳头红肿程度显著,乳汁明显变黄、变稠,伴有絮状脓物出现。而试验组、空白对照组家兔的乳头表现未见异常。表明该中药膜剂对家兔的乳房炎具有较好的预防保护作用。本论文对上述试验结束时各组家兔的血液抗氧化指标进行了检测。结果显示,不用药对照组家兔血中的SOD、GSH-Px的活性较空白对照组显著降低,NO、MDA含量较空白对照组显著增加。中药膜剂组家兔血液的上述各项指标则与空白对照组无明显差异。提示受试中药膜剂正是通过对家兔乳房炎的预防,进而保护了机体的抗氧化能力。
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