目的:研究井穴放血通过HIF-1α/BNIP3通路介导的线粒体自噬对急性高原低氧模型大鼠脑损伤的保护作用,初步探讨井穴放血对急性高原低氧脑损伤治疗的生物学机制,为临床防治急性高原低氧性脑损伤提供新思路。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照(A)组,低压低氧(B)12h、24 h、48 h、72 h组,井穴放血干预(C)12h、24 h、48 h、72 h组。C组大鼠行十二井穴放血预处理,每日一次,共7天;A组大鼠正常饲养并每日抓取一次,方法同B、C两组,共7天;7天后,对A组大鼠进行取材,并将B、C两组大鼠置于实验动物低压模拟舱(海拔5000 m)内制备急性高原低氧脑损伤模型。采用HE染色法观察大鼠脑海马组织显微结构变化;ELISA法检测大鼠外周血清S100B、GFAP、HIF-1α、VEGF水平;RT-PCR技术检测大鼠脑海马组织HIF-1α、BNIP3 m RNA的表达情况;Western Blot技术检测大鼠脑海马组织Beclin-1、LC3蛋白的表达情况。结果:1.HE染色结果:与A组相比,B组各时间点大鼠脑海马组织有不同程度损伤,且损伤程度随缺氧时间变化,其中,72h损伤最严重。同时间点比较,C组大鼠海马组织损伤程度较B组轻。2.Elisa结果:与A组相比,B组各时间点大鼠血清S100B、GFAP、HIF-1α、VEGF水平明显升高(P<0.01)。同时间点与B组相比,C组血清S100B、GFAP水平明显降低(P<0.05或P<0.01),HIF-1α、VEGF水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。3.Real time PCR结果:与A组相比,B组各时间点大鼠海马组织HIF-1α、BNIP3 m RNA表达明显升高(P<0.05)。同时间点与B组相比,12h、24h时C组海马组织HIF-1α、BNIP3 m RNA表达较B组升高(P<0.05),48h、72h时两组比较无统计学意义(P>0.05)。4.Western-blot结果:与A组相比,24h时,B组大鼠海马组织Beclin-1蛋白表达升高(P<0.01),12h、48h、72h两组比较无统计学意义(P>0.05);B组各时间点海马组织LC3II蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。同时间点与B组相比,24h时,C组海马组织Beclin-1蛋白表达升高(P<0.01),12h、48h、72h时两组比较无统计学意义(P>0.05);24h、48h、72h时,C组海马组织LC3II蛋白表达明显升高(P<0.01),12h时两组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:血清S100B及GFAP含量变化可作为高原低氧脑损伤的评价指标;井穴放血干预能改善高原低氧引起的脑损伤,其机制可能与影响HIF-1α/BNIP3信号通路介导的线粒体自噬水平有关。