Cav1.2α1c亚单位在宫颈癌中的表达及临床意义

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前言宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,近年发病有明显的年轻化趋势,目前病因尚未完全明了,已知高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要危险因素,其他因素可能也参与宫颈癌的发生、发展,其中包含离子通道的变化。钙离子通道是指细胞外的钙离子内流入细胞时通过的离子通道,普遍存在于机体的各种组织和细胞,参与机体的各种生理功能。大量研究表明钙离子通道与肿瘤的发生、发展有密切关系。L-型钙离子通道即Cav1.2是电压依赖性钙离子通道(VGCCs)的一个亚型,广泛分布于人体的正常组织中。已有报道提示Cav1.2在结肠肿瘤、胰腺癌、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤组织中均有表达,但在宫颈癌中表达情况尚无报道。本研究目的是通过分析Cav1.2在宫颈正常组织、宫颈鳞癌组织、放化疗后宫颈癌组织中的表达情况,探讨Cav1.2与宫颈鳞癌的发生、发展的关系,及放化疗对Cav1.2的影响。材料与方法一、标本的采集取自中国医科大学附属第一医院妇科2007年5月至2008年11宫颈活检、手术切除之标本,宫颈癌60例,其中有10对宫颈癌组织为同一病人治疗前和放化疗两周时先后取材,正常宫颈组织标本10例。试验标本均经组织病理学诊断证实。所有标本取后均迅速液氮冷冻保存备用。宫颈癌患者的临床病理资料包括:①采用国际妇科联盟(FIGO)分期标准:Ⅰ期13例,Ⅱ期27例,Ⅲ-Ⅳ期10例;②根据组织学分类:G1∶高分化13例,G2∶中分化23例,G3∶低分化14例;③治疗前后:同一患者治疗前及放化疗两周时配对,共10对;④年龄分组:以40岁为界分为两组,≤40岁(15例)及>40岁(35例)。二、方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Cav1.2α1C亚单位mRNA在50例宫颈癌组织,10例经放化疗后的宫颈癌组织,10例正常宫颈组织中的表达。三、PCR电泳结果判定标准取5μl扩增产物用EB染色的2%的琼脂糖凝胶电泳,以Dl-2000为Marker,凝胶成像仪观察结果后拍照记录,Bandscan凝胶图像扫描分析软件进行密度扫描,测定Cav1.2α1C亚单位基因和β—action基因扩增产物的灰度(光密度值×面积),计算其比值,作为各个样本α1C亚单位基因的相对表达丰度,最终得出Cav1.2α1CmRNA在宫颈癌及宫颈正常组织中的相对含量。四、统计学处理所有数据资料均采用SPSS14.0软件进行统计处理,数据以均数±标准差(Mean±SD)表示,各组计量资料的结果采用t检验,方差分析,P<0.05有统计学意义。结果(一) Cav1.2α1C mRNA在正常宫颈和宫颈鳞癌中的表达Cav1.2α1C mRNA在宫颈鳞癌中表达明显高于正常宫颈组织,其差异有显著性意义(P=0.016)。(二) Cav1.2α1C mRNA在不同临床分期宫颈鳞癌中的表达Cav1.2α1C mRNA在Ⅰ期宫颈鳞癌,Ⅱ期宫颈鳞癌,Ⅲ、Ⅳ期宫颈鳞癌中的表达均明显高于正常宫颈组织,差异有显著性意义(P=0.000,P=0.000,P=0.001);Ⅰ期宫颈癌与Ⅱ期宫颈癌相比,差异有显著性意义(P=0.038);Ⅰ期宫颈癌与Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌相比,差异具有显著性意义(P=0.004);Ⅱ期宫颈癌与Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌相比,差异具有显著性意义(P=0.008)。(三) Cav1.2α1C mRNA在不同病理分级宫颈鳞癌中的表达Cav1.2α1C mRNA在高、中分化与低分化宫颈鳞癌中的表达明显高于正常宫颈组织,有显著性差异(P=0.041,P=0.003);在高、中分化与低分化相比,差异有显著性意义(P=0.038)。但高分化与中分化之间比较,无统计学意义(P>0.05)。(四) Cav1.2α1C mRNA在同一标本放化疗前后对照组织中表达Cav1.2α1C mRNA在宫颈鳞癌放化疗后组织中也有表达,与放化疗前同一组织相比明显降低,其差异有显著意义(P=0.005);Cav1.2α1C mRNA在宫颈鳞癌放化疗后组织中表达比对照组增高,但无显著性差异(P=0.64)。(五)年龄对Cav1.2α1C mRNA在正常宫颈和宫颈癌表达的影响对正常宫颈组和宫颈癌组的平均年龄进行比较,其差异无显著性意义(P=0.116);Cav1.2α1C mRNA在不同年龄组宫颈癌中的表达无显著性差异(P=0.428)。结论1、Cav1.2参与宫颈癌恶性增殖过程,提示钙离子通道的激活与宫颈癌变有关。2、Cav1.2与宫颈癌的临床分期及分化程度呈正相关,提示钙离子通道的激活与宫颈癌恶性进展相关。3、放化疗可抑制Cav1.2的表达。
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