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灰霉病是一种世界性的重要病害,由葡萄孢属真菌(Botrytis)及相关类群(Botrytis-ikefungi)引起。常在露地及保护地作物上发生,较难以防治。由于葡萄孢属真菌及相关类群中有些种的形态极为相似,应用传统的分类鉴定方法难以区分。本研究对葡萄孢属真菌及相关类群的COI基因进行克隆并分析,探索COI基因能否对葡萄孢属真菌及相关类群进行分类和鉴定。取得了如下的研究结果:(1)获得了 19个种47个菌株的COI基因所有外显子。结果表明:COI基因的所有外显子全长为1719 bp,编码572个氨基酸,其一致性非常高,种内一致性达99.96%～100%。葡萄孢属种间一致性达到98.08%～100%。Streptobotrys与葡萄孢属真菌COI基因的所有外显子一致性为98.25%～99.53%,Amphobotrys与葡萄孢属真菌COI基因所有外显子的一致性为96.28%～97.79%,除了Amphobotrys与葡萄孢属具有一定差异,其他的菌株的所有外显子一致性均高于98%,Botrytis cinerea与Botrytispseudocinerea的COI基因所有外显子的一致性更是高达100%。因此,COI基因外显子序列不能用作葡萄孢属及相关属真菌的分类和鉴定。(2)获得了 19个种47个菌株COI基因的全序列。对序列分析发现:COI基因的全序列种内一致性较高,除3个种的种内一致性在84%～89%之间,其余种的种内一致性均在99%以上。种间差异较大,长度变化范围为9,219～24,350bp。47个葡萄孢菌株的COI基因均含有内含子,个数从6个到13个不等。这些内含子插入位点比较固定,共有18个内含子插入位点,其中有11个位点的内含子出现比较频繁(>3次),有7个位点的内含子较为少见(<3次)。内含子的大小变化较大,最小的内含子DNA长度为515bp,最大的内含子DNA长度为3,152bp。这些COI基因内含子在这47个不同葡萄孢菌株中呈现了补丁状(patchiness)分布。19种葡萄孢COI基因在内含子上差异较大,可以用于区分葡萄孢属真菌及相关类群。同时I-14号内含子在供试葡萄孢属真菌和Streptobotrys中非常保守,序列一致性达到98%以上。(3)由于不同种COI基因差异较大,同时其序列长度较大,不方便直接应用,为了简便而快速区别不同物种,设计了 3对特异性PCR引物:BPCF/BPCR,BF/BR和 7FW/7R。引物 BPCF/BPCR 可以区分Botrytis cinerea与Botrytispseudocinere。引物BF/BR可以区分Botrytis fabae及Botrytis fabiopsis。而引物7FW/7R可以将葡萄孢属和Streptobotrys与其它供试核盘菌科真菌区分开。