绵羊胚胎玻璃化冷冻方法及冷冻试剂的研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:poco666
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试验1:首先利用小鼠胚胎进行冷冻试验,小鼠经超数排卵,取胚胎进行常规冷冻,每支细管装3枚左右的胚胎。在室温下,将胚胎直接放入装有无水乙醇的ET-1N型冷冻仪内,以3℃/分的速率降温至-6.5℃,诱发结冰,继续停留10分钟,然后以0.3℃/分的速率降温至-29.5℃,然后以0.1℃/分的速率降温至-33℃,取出胚胎细管,直接投入液氮中保存。 玻璃化细管法进行小鼠胚胎冷冻,试验利用EFS40玻璃化液冷冻小鼠胚胎,平衡2min后投入液氮中保存,解冻时在室温25℃水中进行解冻。轻轻振动约10s钟后取出。常规冷冻胚胎可利用率为35.85%,玻璃化冷冻胚胎可利用率为45.45%。 试验2:取经FSH超排的绵羊胚胎,经常规冷冻和玻璃化细管法以及开放式细管法(OPS法冷冻),本研究应用EFS40和EDFS40玻璃化液对3~3.5日龄和6~6.5日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻,每支细管装2枚左右的胚胎。在现阶段国内外最新胚胎冷冻保存研究成果上,在绵羊胚胎上首次采用OPS法与传统细管法进行比较,玻璃化试剂EDFS40也首次在绵羊鲜胚中应用,并且EFS40和EDFS40玻璃化试剂对绵羊体内受精胚胎冷冻进行研究比较,解冻使用0.5M蔗糖或胚胎存放液脱出防冻剂,经形态学鉴定后移植到受体。 绵羊超排共回收104枚胚胎,胚胎形态完整数达85枚,其中常规冷冻法透明带完整率13/15(86.67%),形态完整率10/13(76.92%),妊娠率7/9(77.78%),产子率3/7(42.85%);一步细管法透明带完整率12/14(85.71%),形态完整率10/12(83.33),妊娠率6/9(66.67%),,产子率2/6(33.33%),二步细管法透明带完整率16/16(100%),形态完整率13/16(81.25%),妊娠率9/11(81.81%),产子率5/9(55.56%);OPS法透明带完整率27/27(100%),形态完整率22/27(81.48%),妊娠率15/20(75%),产子率8/15(53.33%)。 本试验研究表明:绵羊胚胎应用EFS40和EDFS40玻璃化液冷冻,解冻后利用蔗糖或胚胎存放液脱除保护剂,经鉴定移植得到较高的妊娠率和胚胎存活率。并且在绵羊体内受精胚胎上首次采用OPS开放式细管法进行胚胎冷冻,也取得很好的效果。玻璃化冷冻技术不需要特殊的冷冻仪设备,并且操作程序简单、省时,该过程不必由专业技术人员进行操作,且脱除抗冻剂的解冻液配制比较简单,使用效果好、利于在现场条件下操作,与传统胚胎冷冻方法相比具有明显优势,有利于加速绵羊品种改良。
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