以对鸡外周血单核细胞(PBMC，peripheral blood mononuclear cells)具有最佳刺激活性的CpG基序(CpG Motif)为基础，人工合成含有5拷贝此种基序的寡聚脱氧核苷酸(oligodexynucleotides，ODN)并在两端设计2对酶切位点，通过2次定向克隆和3次平末端克隆，将其分步串联连接入pcDNA3.0载体中的多克隆位点中，获得了一组含有不同拷贝数(5、10，20，40，60拷贝)CpG基序、对鸡PBMC具有免疫刺激活性的重组质粒。应用淋巴细胞分离液分离AA肉鸡PBMC，以所构建的、富含CpG基序的三种重组质粒pcDNAACpG—-3，pcDNAACpG-4，pcDNAACpG-5为刺激原，LPS作为阳性对照，进行体外淋巴细胞转化试验，用MTT比色法来测定淋巴细胞的增殖能力和代谢强度。通过比较含有不同拷贝数CpG基序重组质粒、同一重组质粒的不同浓度对鸡PBMC的免疫刺激效果，筛选出对鸡具有最佳免疫刺激活性的重组质粒及其剂量。将重组菌在含氨苄青霉素的固体LB培养基中连续传30代，并对不同代次重组质粒的遗传稳定性进行鉴定。结果表明，在30代内，重组质粒pcDNAACpG-5的拷贝数、CpG ODN序列及氨苄青霉素抗性都保持稳定。