植酸酶是酸性磷酸化酶的一种，可将有机磷水解为肌醇和无机磷。植酸酶作为添加剂，应用于养殖、食品加工和医药生产中。尤其广泛的用于添加到动物饲料中，提高饲料中磷的利用率，提高动物的生产性能，减轻动物高磷粪便所导致的环境的磷污染。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统是80年代开发的一种外源蛋白表达系统，具有操作难度低，易于培养，生长速度快，表达量高，成本低等方面的优点，在外源蛋白的表达方面具有独特的优势，被广泛用于医药生产和科学研究。本研究以来源于大肠杆菌的植酸酶基因为实验材料，采用定点突变的方法，通过对密码子优化后的植酸酶基因appAm进一步突变，转化毕赤酵母，通过比较各菌株产植酸酶的性质，筛选热稳定性好的植酸酶基因工程菌。主要内容包括：　　⑴运用生物化学和分子生物学的相关知识，确定了6个突变位点并设计了6对分别含有6个突变位点的互补引物。将连接在pGEM-T-easy载体上的appAm基因进行单突变和叠加突变。以pPIC9为穿梭载体，通过LiC1转化方法，将各个突变体基因转化到毕赤酵母GS115菌株中。通过SDS-PAGE和酶活检测的方法，筛选出分别含有不同突变位点的6个阳性重组菌株(M1，K24E，K43E，C2，M2，M4)。　　⑵对突变前的APPA及其6个突变体的蛋白纯化方法进行了优化，在经过硫酸铵沉淀，离子交换吸附色谱，葡聚糖凝胶色谱三步纯化后，粗酶液中的色素和DNA等杂质已经基本去除，得到纯度较高的蛋白，可进行下一步的功能分析。　　⑶通过钼蓝法对各个纯化后的植酸酶进行酶活测定，确定各个突变体蛋白的最适温度和耐热性、最适pH和pH稳定性、Km、Vm等。结果表明:突变体M2和M4的最适反应温度提高了5℃，为65℃;突变体K24E的最适pH减小了0.5，为4.0;除C2和K43E外，其余几种突变后植酸酶在pH2～8处理2h后，活性都能保持在80％以上;突变体M2，M4，K24E和M1仍保留50％以上的活性，而突变前的APPA在70℃处理20 min之后，就几乎没有残余活性。　　⑷通过比较，最终获得综合性质较优的突变体植酸酶K24E，最适反应温度为60℃，70～90℃处理20 min，残余活性50％以上。最适反应pH为4.0，在pH2～8的缓冲液中处理2h后，仍然保持80％以上的活力。此外，突变体K24E的Km值比APPA减小了30％，Vm值增加了20％。