论文部分内容阅读
目的 探讨T型钙通道诱导细胞增殖的机理，研究T型钙通道与AngⅡ诱导细胞增殖的信号转导通路之间的关系。 方法 通过酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，应用第五代传代细胞，实验随机分为8组:①对照组;②AngⅡ组;③AngⅡ+氯沙坦钾组;④AngⅡ+PD98059组;⑤PD98059组;⑥AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组;⑦氯沙坦钾组;⑧米贝拉地尔组。MTT，RT-PCR，Western方法测定AngⅡ诱导细胞增殖的Ras/PKCζ/MEK/ERK1/2信号转导通路阻滞剂及选择性T型钙通道阻滞剂对体外酶消化法培养的大鼠血管平滑肌细胞的T型钙通道的表达的影响。 结果 一、细胞增殖 1、不同浓度AngⅡ刺激VSMC24h后，MTT法检测OD值。结果显示0.01～10umol/L浓度的AngⅡ能刺激VSMC增殖，且浓度为0.1umol/L时作用最明显，达到平台期，其OD值为1.003±0.1，与0.1％FBS组相比差异有显著性(P＜0.05)。 2、不同浓度米贝拉地尔刺激VSMCs24h后，MTT法检测OD值，结果显示米贝拉地尔1.25～10umol/L浓度能抑制AngⅡ刺激的VSMCs的增殖，且浓度为2.5umol/L时作用最明显，与AngⅡ组相比差异有显著性(P＜0.05)。 二、RNA和蛋白质水平 1、AngⅡ0.1umol/L刺激使大鼠血管平滑肌细胞的Cav3.1表达明显增加，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05);表明血管紧张素Ⅱ可以增加血管平滑肌的Cav3.1的表达。 2、单独MEK阻滞剂PD9805910umol/L刺激后，大鼠血管平滑肌细胞的Cav3.1表达与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)，表明无AngⅡ刺激的血管平渭肌细胞，MEK阻滞剂PD98059不能影响Cav3.1的表达;单独血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦钾1umol/L刺激后，与对照组相比，其Cav3.1表达亦无明显变化，无统计学差异(P＞0.05)，表明无AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞，其受体拮抗剂并不能抑制细胞中Cav3.1表达。 3、AngⅡ+氯沙坦钾组与AngⅡ组相比，大鼠血管平滑肌细胞的Cav3.1表达下降，有统计学差异(P＜0.05);AngⅡ+PD98059组与AngⅡ组相比，大鼠血管平滑肌细胞的Cav3.1表达下降，有统计学差异(P＜0.05);AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组与AngⅡ组相比，血管平滑肌细胞的Cav3.1表达明显下降，有显著统计学差异(P＜0.01);而AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组与AngⅡ+氯沙坦钾组及AngⅡ+PD98059组相比，大鼠血管平滑肌细胞Cav3.1表达亦有显著下降，有统计学差异(P＜0.05),综上表明AT1及PD98059在有AngⅡ刺激的血管平滑肌细胞中可以显著抑制Cav3.1表达。 结论 我们的结果显示，AngⅡ通过诱导血管平滑肌细胞过量表达T型钙通道继而促使细胞增殖，即T型钙通道过量表达是Ras/PKCζ/MEK/ERK1/2信号转导通路的下游蛋白产物。