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乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是一种能通过反转录进行复制的小分子DNA病毒,它能感染宿主引起乙型病毒性肝炎(Hepatitis B)疾病。HBV感染是世界性的公共健康问题,慢性感染会导致肝纤维化、肝硬化和肝癌。目前,临床上治疗慢性乙病毒性肝炎的方式主要有两种:干扰素α的注射和核苷(酸)类似物如恩替卡韦、拉米夫定、阿地福韦等药物的服用,但是这两种方式都存在一些不足,如高剂量干扰素α存在宿主应答率低、副作用大等缺点,而核苷(酸)类似物药物容易引起耐药性及停药反弹等缺点,所以急需寻找新型的抗乙型肝炎病毒药物。热休克蛋白(Heat-shock proteins,HSPs)是细胞在应激状态下产生的一种伴侣蛋白,在HBV复制过程中,对反转录酶(P蛋白)与前基因组RNA上的RNA包装信号(ε)的相互作用至关重要。KNK437能够通过影响热休克因子HSF和HSE的相互作用,来抑制热休克蛋白的mRNA和蛋白的积累,以及影响热休克蛋白在HeLa细胞、结肠癌、鳞状细胞癌和成胶质细胞瘤的培养细胞中诱导耐热功能。而且KNK437还能在杆状病毒感染周期中,抑制病毒颗粒的产生。但KNK437对乙肝病毒是否产生抑制作用,依然未知。本研究主要运用了三种肝癌细胞系模型:HepG2.215细胞系、瞬时转染1.1×HBV(pCH9-3091)质粒的Huh7细胞系和1.3×HBV(pGEM-1.3×HBV)质粒的Huh7细胞系。适当浓度的KNK437处理细胞后,用CCK-8的方法测定了药物的细胞毒性、酶联免疫法检测了表面抗原HBsAg和HBeAg的分泌、荧光定量PCR的方法检测了细胞内HBV DNA和RNA水平的变化,最后还检测了KNK437对热休克蛋白的影响。研究结果表明20μM KNK437对细胞没有毒性,且在该浓度下KNK437能够抑制HBV HBsAg和HBeAg的分泌,并且能够大幅度下调细胞内HBV DNA和RNA水平,抑制HBV的复制和转录,实验也表明KNK437能够抑制热休克蛋白的表达。本研究说明KNK437能够在细胞水平抑制HBV的复制和转录,以及抗原蛋白的表达。核苷(酸)类似物药物作用机制都发生在HBV复制阶段,长期用药后容易发生突变。与其不同的是KNK437的作用靶点是细胞调节蛋白而非病毒本身,它可能作为一种新颖的靶向热休克蛋白的抗乙型肝炎病毒药物,具有较高的应用前景。