丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是一种唇形科鼠尾草属多年生草本植物,其干燥根及茎作为我国传统药材已经广泛应用于冠心病、慢性肾功能衰竭、动脉硬化等疾病的预防和治疗。本研究以SmJAZ8作为诱饵蛋白,通过酵母双杂交筛选与其互作的转录因子,为后续探讨JASMONATE ZIM-DOMINE(JAZ)蛋白与转录因子互作调控丹参酮类和酚酸类物质合成的作用奠定基础。本研究取得以下研究结果:1?通过获得丹参各组织器官总RNA进一步制备了丹参全长均一化AD文库?本研究所构建的酵母文库的滴度大于1×10~7 cfu/mL,酵母文库库容为3.1×10~7 cfu/mL,平均插入片段大于1.0 kb?2?以BD-SmJAZ8为诱饵载体,酵母双杂交筛选酵母AD(均一化)文库,获得289个克隆?其中一个标号为8-6的克隆通过BLASTX分析表明是一个bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子,将其命名为SmbHLH128。3?通过双分子荧光互补技术(BiFC)验证SmJAZ8与筛选到的转录因子SmbHLH128确实存在互作关系。随后截短SmJAZ8结构域,通过酵母双杂交验证了SmbHLH128与SmJAZ8的相互作用区域在SmJAZ8蛋白的Jas结构域?4?验证SmJAZ8互作转录因子SmbHLH128的转录激活结构域在其转录激活结构域(TAD,Transcriptional Activation Domain)?构建SmbHLH128转录因子基因过表达载体和显性抑制SRDX表达载体,获得过表达转基因毛状根株系10个,显性抑制表达毛状根株系11个?通过荧光显微镜鉴定和qPCR分析确定转基因阳性毛状根的获得。