卵巢恶性肿瘤是女性妇科肿瘤中最为常见的死亡原因之一。全球每年将近22万女性被诊断为上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer,EOC）,其中约14万女性患者死于该疾病,是女性癌症相关死亡的主要因素,也是致死率最高的妇科恶性肿瘤[1]。MUC16/CA125（Mucin 16,粘蛋白16）糖蛋白作为上皮性卵巢癌经典的生物学标志物和肿瘤恶变的主要驱动因子,靶向MUC16/CA125可能成为卵巢癌特异性治疗的有效策略。在现阶段肿瘤研究中,CRISPR筛选的广泛应用能够高通量地探寻出多种肿瘤生物学的基因功能,如肿瘤生长、转移、合成致死、耐药和免疫治疗反应等。通过靶向整个基因组的编码和非编码区域,便捷、高效地对靶基因进行生物学检测。与此同时,针对EOC的高致死率,精准靶向治疗药物也亟待开发。近年来肿瘤免疫学推动了卵巢肿瘤在治疗中的进展,其中一些基因的蛋白质产物,特别是酶,已作为突破性新药的直接靶标。然而因卵巢癌起病隐匿、恶性程度高、转移性强等特点,目前临床仍无法提供有效的早期筛查手段、治疗方法和预后指标,导致卵巢癌患者低生存率及预后不良。基于以上科研及临床问题,本课题的目标是利用相互独立的筛选系统筛选出抑制卵巢癌转移的相关基因并鉴定出选择性靶向MUC16/CA125的小分子及靶标,进而预估和治疗卵巢癌。本研究首先利用来自张峰实验室的CRISPR/Cas9人类全基因组（human genome-wide）敲除文库（knock out library）,选取人卵巢癌低转移细胞系SKOV3,成功建立了小鼠卵巢癌原位种植模型,通过体内筛选去除抑制卵巢癌种植性转移相关基因,诱导卵巢肿瘤发生转移,从而筛选出卵巢癌转移抑制基因。同时利用等基因双荧光的独立筛选系统,对MUC16/CA125具有选择性抑制作用的356982个化合物中的6个不同文库进行了高内涵小分子筛选以及对人激酶组RNAi文库进行了合成致死激酶筛选,鉴定出靶向MUC16/CA125的候选药物和潜在靶点。研究结果显示,从CRISPR/Cas9文库中筛选出的6722个与卵巢癌转移相关的候选基因中,白细胞介素-2诱导的T细胞激酶（Interleukin-2-inducible T-cell kinase,ITK）,一种属于非受体酪氨酸激酶Tec家族成员的细胞毒性淋巴细胞相关基因,被证明是在TCGA和GEO数据集中能够独立有效地预测卵巢癌患者临床结果的关键因素。既往的研究表明,ITK在炎症过程、肿瘤发生和抑制剂的开发中起着重要作用。整合分析显示,ITK作为参与免疫相关通路的重要分子,参与了许多重要的致癌信号通路。此外,我们发现ITK与CD244和SOCS1（抑癌基因）呈正相关,但在低ITK与SMARCD1（促癌基因）呈负相关。同时我们用MCP-counter和CIBERSORT方法对所有样本进行了免疫相关分析,发现ITK和细胞毒性淋巴细胞之间密切相关。我们通过双荧光高内涵的筛选确定了细胞周期蛋白依赖性激酶（Cyclin-dependent kinase,CDK）flavopiridol对MUC16阳性卵巢癌细胞系体外和体内的抑癌作用,并证明了从人激酶组RNAi文库中筛选出的整合素连接激酶（Intergrin-linked kinase,ILK）和葡萄糖激酶（Glucokinase,GCK）是潜在的靶标,二者沉默均可在体外和体内优先抑制MUC16阳性细胞的侵袭,同时表明MUC16阳性细胞生长抑制是由MAP激酶和非受体酪氨酸激酶的激活减少所导致。综上所述,我们应用一套成熟、完善的筛选系统成功地筛选出了抑制卵巢癌转移的相关基因,并研发了一类新型选择性靶向MUC16/CA125的全面筛选方法,确定了适合进一步临床开发的候选药物和相关靶点,为今后卵巢癌诊断、治疗及预后提供了一个新的思路和途径。