青叶胆和圈纹獐牙菜的质量等同性及抗肝纤维化作用研究

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目的:建立红外光谱结合化学计量学獐牙菜属植物鉴别方法;与药典收载种青叶胆为对照,对圈纹獐牙菜的主要活性成分进行含量分析并建立化学指纹图谱,进行抗肝纤维化作用及其机制进行研究,比较其化学成分及药效方面的等同性和差异性,为扩大资源提供基础。方法:(1)采用傅里叶变换红外光谱结合化学计量学分析青叶胆及其同属近缘种的亲缘关系,结合化学计量学分析光谱数据。(2)使用HPLC法测定青叶胆及圈纹獐牙菜的主要活性成分含量并建立HPLC指纹图谱。(3)采用MTT法检测青叶胆及圈纹獐牙菜的醇提取物对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的抑制作用。(4)采用CCL4建立化学性肝纤维化模型。造模成功后,以青叶胆及圈纹獐牙菜醇提取物三个剂量(0.2 g/kg、0.4 g/kg、0.8 g/kg)灌胃给药,每天1次,给药8周,检测肝功能指标ALT、AST、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)及总胆红素(TBIL)的浓度和观察肝脏病理组织切片形态特征等。结果:(1)青叶胆及其近缘种主要吸收区域为900~400 cm-1,1310~900 cm-1,1500~1310 cm-1,1800~1500 cm-1,2800~3000 cm-1,3000~3500 cm-1附近。青叶胆及其近缘种主要吸收区域为附近二阶导数图谱在400~1000 cm-1指纹区吸收峰差异明显,物种之间吸收峰的峰数、峰强、峰型差异较大。分析表明青叶胆与圈纹獐牙菜、显脉獐牙菜亲缘关系较近。(2)青叶胆及圈纹獐牙菜基原植物指纹图谱共有模式的建立及相似度评价,二者的化学成分相似,但主要的3个活性成分含量差异明显。(3)体外抗肝损伤实验表明,青叶胆及圈纹獐牙菜对HSC-T6细胞增殖有抑制作用随着给药浓度增加而增加,表明青叶胆及圈纹獐牙菜醇提取物均有抗肝纤维化作用。(4)体内抗肝损伤实验结果显示青叶胆及圈纹獐牙菜对血清中肝功能指标ALT、AST、TBIL、TP、Alb含量具有显著下降的作用(P<0.05),表明青叶胆及圈纹獐牙菜均有抗肝纤维化作用,且两者作用相近。结论:FTIR结合化学计量学方法,能够快速鉴别不同种类獐牙菜属植物,探索青叶胆及其近缘种之间的亲缘关系,为獐牙菜属植物的鉴别和亲缘关系研究提供一种快速、有效的方法。通过研究青叶胆和圈纹獐牙菜主要活性成分和抗肝纤维化作用,证实圈纹獐牙菜有作为其新药源的潜质,其抗肝纤维化作用值得更深入研究。
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