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目的:观察高钙对大鼠肾上皮细胞(NRK细胞)的损伤效应以及对骨桥蛋白(OPN)表达的影响,探讨高钙尿在含钙肾结石形成中的作用和机制。方法:分别用含钙终浓度为1mg/ml、2mg/ml和3mg/ml的DMEM完全培养基培养NRK细胞(实验组1,2,3),空白对照组采用DMEM完全培养基,共同培养3小时、6小时和24小时后,采用CCK-8法检测细胞增殖;细胞培养上清液应用ELISA法检测细胞OPN的分泌情况;收集细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;应用real timeRT-PCR法和Western Blot法,检测细胞OPN基因mRNA及蛋白的表达情况。结果:(1)空白对照组、实验组1、实验组2和实验组3培养3小时的吸光度值(OD值)分别为3.147±0.060、2.844±0.309、2.321±0.089、19.893±0.611,6小时为3.472±0.097、2.878±0.127、2.545±0.06、2.222±0.047,24小时为3.851±0.096、1.831±0.076、0.669±0.093、0.569±0.004,除实验组1在3h较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)外,各实验组在不同时间点较对照组差异均有统计学意义(P<0.05)。各实验组内在不同时间点进行两两比较,除实验组1在3h和6h差异无统计学意义外,其他均有统计学意义(P<0.05)。(2)各组细胞在培养3小时后的凋亡率分别为2.36%、3.07%、4.53%、5.40%,6小时后的凋亡率分别为2.36%、4.75%、7.28%、7.83%,24小时后的凋亡率分别为2.36%、41.76%、56.84%、62.96%。(3)各组细胞培养3小时后上清液中OPN的含量(μg/ml)分别为10.461±1.573、14.820±1.213、17.150±0.841、19.893±0.611,6小时分别为10.461±1.573、23.791±1.518、26.307±0.876、28.607±0.733,24小时分别为10.461±1.573、26.882±1.100、28.948±1.818、24.377±0.641。三个时间点各实验组分别与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。同一实验组内在不同时间点进行两两比较,除实验组2在6h和24h差异无统计学意义(P>0.05)外,其余均有统计学意义(P<0.05)。(4)三个实验组在高钙干预3小时和6小时后细胞OPN蛋白相对表达量较对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。同一实验组内在不同时间点进行两两比较,除实验组2和实验组3在3h这一时间点差异无统计学意义(P>0.05)外,其余均有统计学意义(P<0.05)。(5)三个实验组在高钙干预3小时(6小时)后细胞OPN mRNA的相对表达量分别是空白对照组的2.803(9.989)倍,5.195(12.999)倍,8.380(27.929)倍,较对照组明显升高。结论:高浓度钙可明显抑制NRK细胞增殖,诱导细胞凋亡,细胞OPN基因表达上调,细胞分泌OPN增加。推测高钙尿可能通过诱导肾小管上皮细胞损伤和OPN的表达上调,促进尿液晶体与肾小管上皮细胞发生黏附,从而在肾结石形成中产生一定的作用。