细菌、病毒感染是最常见的感染性疾病，严重威胁人类健康。这两类感染性疾病起病隐匿，临床症状、体征缺乏特异性，且临床用药存在很大差异，若治疗不及时病情进展迅速。因此，治疗前通过检测手段有效区分细菌、病毒感染尤为重要。目前，部分大中型医院已利用C反应蛋白(C reaction protein，CRP)和血清淀粉样蛋白A（serum amyloid A，SAA）作为临床鉴别细菌、病毒感染的指标。在检测方法上主要以化学发光法和免疫比浊法为主，这些方法不仅存在不能同时检测SAA、CRP的问题，而且由于设备和人员操作技术的限制难以大规模应用于基层社区门诊。因此，本研究拟采用时间分辨荧光免疫层析技术，建立一种可同时定量检测血清SAA、CRP含量的检测方法;供基层或社区医疗机构、大型医院床旁快速检测及小样本检测。　　目的:　　本研究旨在以双抗体夹心法为原理，利用时间分辨荧光免疫层析技术建立一种可同时检测血清中SAA、CRP含量的定量检测方法，满足基层或社区医疗机构床旁快速检测需要，为细菌、病毒感染的早期筛查、药物的选择提供了一种便捷、准确的检测技术。　　方法：　　1.配对抗体的筛选：以本实验室建立的荧光免疫层析技术平台为基础，分别筛选质控线包被抗体、SAA和CRP配对抗体。　　1.1质控线包被抗体筛选：以实验室纯化的兔IgG多克隆抗体按常规方法标记，用编号为SKT28、SKT29、SKT30、SKT31四株鼠抗兔IgG单克隆抗体分别作为包被抗体，进行配对筛选，通过观察C线荧光强度筛选出质控线包被抗体;　　1.2SAA配对抗体筛选：通过检测系列SAA室内参考品，以线性相关性为依据，对编号为MS2201、MS2202、MS2203三株鼠抗人SAA单克隆抗体进行配对筛选;　　1.3CRP配对抗体筛选：通过检测系列CRP室内参考品，以线性相关性为依据，对编号为MC003、MC004、MC005三株鼠抗人CRP单克隆抗体进行配对筛选。　　2.SAA荧光免疫层析检测方法的建立：通过筛选玻璃纤维棉、硝酸纤维素膜确定本研究所需的微球垫、包被膜;通过研究EDC、NHS最适比例、微球标记过程中缓冲液最适pH值、微球保护液配方、样品稀释液组方等确定最优的试纸条制备工艺，并考察试纸条线性、准确度、精密性等性能。　　3.SAA、CRP荧光免疫层析联合检测方法的建立：通过SAA和CRP配对抗体最适标记量和包被量、三种标记物（荧光微球-MS2203、荧光微球-MC004、荧光微球-兔IgG多克隆抗体）最适混合比例等研究确定SAA、CRP荧光免疫层析联合检测试纸条制备工艺，初步建立SAA、CRP荧光免疫层析联合检测方法。　　4.SAA、CRP荧光免疫层析联合检测试纸条性能评价：对本研究研制的SAA、CRP荧光免疫层析联合检测试纸条进行线性、精密性、准确度、稳定性、交叉反应等性能评价，并与西门子BN ProSpec(R)特定蛋白分析系统对比分析进行方法学比对。　　结果：　　1.优选出SKT30号鼠抗兔IgG单克隆抗体作为质控线包被抗体;MS2203（标记）与MS2201（包被）作为本研究SAA配对抗体;MC004（标记）与MC003（包被）作为本研究CRP配对抗体。　　2.建立了定量检测血清中SAA含量的荧光免疫层析方法。初步筛选出适合的微球垫及包被膜，确定了最佳活化剂比例及标记缓冲液pH，优选出稳定性最佳的微球保护液配方。以此工艺制作的试纸条在0.78～200mg/L时，线性相关性最好，其批内变异系数小于10％、批间变异系数小于15％，符合精密性要求。检测高、中、低值样本，均符合回收率85％～115％的要求。与西门子BN ProSpec⑩特定蛋白分析系统（散射比浊法）同时检测80份临床血清中SAA含量，相关性较好。　　3.本研究初步建立了能够同时定量检测血清中SAA、CRP的时间分辨荧光免疫层析方法。确定了三种标记物（荧光微球-MS2203、荧光微球-MC004、荧光微球-兔IgG多克隆抗体）最适微球混匀比例;确定了活化10μL微球时SAA和CRP单克隆抗体的最佳标记量均为40μg。在此基础上，以检测线性范围及线性相关性确定SAA和CRP单克隆抗体最佳包被量分别为2mg/mL、1.5mg/mL。　　4.对SAA、CRP荧光免疫层析联合检测试纸条进行性能评价。SAA、CRP检测的线性范围均为0.78～200mg/L，相关性好;SAA和CRP批内变异系数均小于10％、批间变异系数均小于15％，符合精密性要求。检测三种不同浓度分析样品，SAA、CRP回收率均在85％～115％之间，符合回收率要求。血清常见干扰物（血红蛋白、甘油三酯、胆红素）对SAA、CRP的检测无影响，试纸条特异性良好，且分别单独检测SAA、CRP时彼此无交叉反应，互不干扰;在37℃条件下可保存21天，稳定性良好;通过与西门子BN ProSpec(R)特定蛋白分析系统（散射比浊法）进行方法学比对，结果显示两种检测方法检测SAA、CRP的相关性较好。　　结论：　　1.本研究确定了微球保护液组方，可使试纸条在37℃的加速破坏试验中稳定保存21天。　　2.采用兔Ig G多克隆抗体标记、鼠抗兔Ig G单克隆抗体包被作为质控线配对抗体，解决了在同一个试纸条上同时检测两种标志物难以定量的难题。　　3.初步建立SAA、CRP时间分辨荧光免疫层析联合检测方法，为细菌和病毒的早期筛查及辅助诊断提供了一种敏感性高、特异性好、操作便捷、准确的检测技术，也为其它标志物联合检测提供了借鉴。