论文部分内容阅读
目的观察大鼠二氧化碳气腹后引起的胃粘膜再灌注损伤并探讨异丙酚对胃粘膜缺血再灌注损伤的保护作用。材料和方法一、实验动物成年雄性Wistar大鼠（由中国医科大学盛京医院实验动物部提供）280～320克左右,实验前禁食24小时,自由饮水。实验前进行1星期的适应性喂养。二、动物分组24只随机分成4组,每组6只。A组:对照组,尾静脉泵注生理盐水（10ml/kg/h）1h,同时保持0气腹压。B组:缺血组,在A组基础上给予20mmHg气腹压力1h。C组:再灌注组,处置同B组,气腹1h后,保持无气腹压0.5h。D组:保护组,20mmHg气腹1h,无气腹0.5h,整个过程中尾静脉泵注1mg/ml的异丙酚10ml/kg/h（异丙酚原液用生理盐水做10倍稀释而成）。三、实验方法10%水合氯醛（3 ml/kg体重）腹腔注射麻醉。然后将动物固定于手术台,尾静脉穿刺,以备泵注异丙酚或生理盐水。腹部酒精消毒,于脐上将气腹针插入腹腔内。A组不向腹腔内充入CO2,保持0气腹压1h;B、C、D组充入CO2,并使气腹压力维持在20mmHg。A、B、C组均泵注生理盐水10ml/kg/h;D组泵注异丙酚10mg/kg/h,异丙酚原液（10mg╱ml）用生理盐水做10倍稀释。C,D组在气腹1h后,停止气腹,保持0气腹压0.5h,每组泵注液体种类及时间,以及气腹压力、气腹时间和气腹后时间见表1。四、观察指标及生化检测1、形态学指标（1）胃粘膜光镜:实验结束时开腹,迅速游离全胃,沿大弯部剖开,冷生理盐水漂洗内容物,在腺胃区中部病变明显部位取2×3mm胃粘膜用10%甲醛固定24-48h,待做光镜标本,常规石蜡包埋,行4um切片,HE染色。（2）胃粘膜透射电镜:胃粘膜标本获得方式同（1）,取1×0.5mm胃粘膜置于2.5%的戊二醛双蒸水固定液中,4℃冰箱保存,待做电镜标本。2、生化学指标（1）超氧化物歧化酶SOD:胃粘膜标本置于液氮中迅速冷冻备用。统一称重后置4℃生理盐水中,制备为10%匀浆,4℃、100000r╱min离心15min,分离上清液,-80℃保存。用黄嘌呤氧化酶法测定。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O.-）,后者氧化羟胺形成亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用比色测定其吸光度,结果以亚硝酸盐单位表示。（2）丙二醛（MDA）:标本制备同上。用硫代巴比妥酸比色法测定。利用过氧化脂质主要降解产物丙二醛在酸性条件下两分子硫代巴比妥缩合生成红色物质,于532nm比色测定。（3）一氧化氮（NO）:标本制备同上。用硝酸还原酶法测定。NO化学性质活泼,在体内代谢很快转为NO2-和NO3-,而NO2-又进一步转化为NO3-,利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-,通过显色深浅测定其浓度的高低。（4）谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）:标本制备同上。GSH-PX可以促进过氧化氢与还原型谷胱甘肽反应生成水及氧化型谷胱甘肽,GSH-PX的活力可用其酶促反应的速度来表示,测定此酶促反应中还原型谷胱甘肽的消耗,则可求出酶的活力。各指标的检测均按试剂盒使用说明操作进行。五、统计分析用使SPSS13.0软件系统进行统计学处理,计量资料以均数±标准差表示。采用t检验分析。P＜0.05认为差别具有显著性意义。实验结果一、各组光镜结果比较A组:正常胃粘膜组织。B组:粘膜下层少量炎细胞浸润,胃粘膜表面有些轻度糜烂。C组:胃粘膜凹陷,形成浅溃疡,粘膜下层炎细胞浸润。D组:炎细胞浸润减少,胃粘膜表面比较平整光滑,接近正常胃粘膜组织。二、各组透射电镜结果比较A组:壁细胞内大量的细胞内小管及正常线粒体,核膜光滑。主细胞内大量粗面内质网及一些正常结构线粒体。B组:壁细胞胞质内少数线粒体有絮状改变,细胞核核型不规则,微管泡系统有所减少。主细胞核形不规则,粗面内质网扩张,线粒体水肿,基质密度下降,外形模糊,内有絮状物改变。C组:壁细胞核形不规则,异染色质边集,微管泡减少,胞质内见有髓鞘样结构,线粒体外膜破损,核膜肿胀。主细胞:核膜肿胀,异染色质边集,粗面内质网过度扩张。D组:壁细胞微管泡系统开始增多。主细胞粗面内质网肿胀相对减轻。三、生化指标再灌注组MDA升高,SOD,NO,GSH-PX降低,与其它各组相比均有统计学意义。异丙酚组与再灌注组相比,MDA降低,SOD,NO,GSH-PX上升,两组比较,差异显著。而异丙酚组各项生化指标与对照组相比均无统计学差异。结论1、二氧化碳气腹对大鼠胃粘膜可以造成缺血再灌注（I/R）损伤。2、异丙酚对大鼠胃粘膜的I╱R损伤具有保护作用。