流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus,CAB)是引起猪、牛、羊等多种动物流产、死胎、弱胎等慢性接触性疾病的一种重要病原体,孕妇也可感染而发生流产。集约化猪场的CAB感染必须引起重视。建立准确、快速的诊断方法是预防和控制本病的重要措施。本研究根据Genbank上公布的多型性外膜蛋白90(pomp90)基因序列设计引物,应用PCR技术获得CAB四种不同片断大小多型性外膜蛋白90(POMP90)的编码基因,构建重组表达质粒,在E.coli BL21中大量诱导表达,通过纯化及复性后得到纯度高、免疫学活性好的POMP90重组蛋白,并以它们为包被抗原,建立了猪CAB间接ELISA抗体检测方法,探讨了其在猪CAB感染血清学检测中的应用价值。1.根据已知基因序列设计引物,以流产嗜性衣原体CP/12株的总DNA为模板,PCR扩增了四种不同片断大小的pomp90基因,将目的基因与原核表达载体pGEX-KG进行连接,构建重组表达质粒,经测序证实构建成功。2.将构建成功的重组质粒在E.coli BL21高效表达,融合蛋白POMP-GST经纯化、复性后进行Western-blot检测,结果表明四种重组蛋白均具有较强的反应原性。3.分别以纯化后的四种重组蛋白作为包被抗原,经各项条件的优化,建立了间接ELISA抗体检测方法,并对大量的临床血清样品进行了检测。结果表明,该间接ELISA抗体检测方法具有灵敏度高、特异性好、准确等优点,且克服了传统间接血凝试验低灵敏度、判断主观性强等缺点。本研究构建了pomp90基因的原核表达质粒,进行原核表达,以纯化复性后的重组蛋白为包被抗原,建立了猪流产嗜性衣原体间接ELISA抗体检测方法,为进一步开展猪流产嗜性衣原体病的诊断研究奠定了基础。