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背景食管癌主要包括食管鳞癌和食管腺癌,在我国主要以食管鳞癌为主,我国是世界上食管癌高发国家之一,也是世界上食管癌高死亡率之一。随着我国医疗技术飞速发展,食管癌早期诊断大大提高,早期食管癌及时发现并且手术根治预后良好,食管癌预后差多与缺乏早期诊断有关,大多数食管癌患者出现症状后多已进展至晚期,预后很差。目前关于肿瘤的基因转录调控方面的研究取得了可喜的成果,已知激活转录因子-2(activating transcription factor-2,ATF-2)是细胞的生长及存活过程中的重要转录因子,最新研究表明ATF2在肿瘤细胞基因的转录调控方面发挥重要作用,ATF2在细胞中定位不同,发挥作用也不一致,ATF2核定位与致癌作用有关,胞质定位与抑癌作用有关,本研究通过检测ATF2mRNA及ATF2在食管癌组织中的表达及改变ATF2表达水平对食管癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响来探讨ATF2在食管癌中的作用。目的通过检测ATF2 mRNA及ATF2在食管癌组织中的表达、构建过表达ATF2基因的慢病毒载体,包装慢病毒并转染食管癌细胞系获得过表达ATF2的稳转细胞系,研究过表达ATF2对于食管癌细胞系的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,探讨ATF2在食管癌中的作用,为食管癌的靶向治疗提供更多理论依据。方法1.对120例食管癌患者的食管癌组织与癌旁组织标本进行ATF2 mRNA基因测序分析。2.免疫组织化学染色检测ATF2蛋白在食管癌组织与癌旁组织标本中的表达。3.使用Western Blot检测10种食管癌细胞系中ATF2的表达。4.根据ATF2基因序列使用PCR技术获得ATF2基因片段,包装慢病毒质粒载体,获得含有ATF2野生型慢病毒载体和ATF2 Thr71位点突变的慢病毒载体基因的慢病毒载体。然后对KYSE-140食管癌细胞系进行慢病毒载体转染实验,将细胞分为3组,(1)空白对照组:使用病毒空载体转染食管癌KYSE-140细胞系;(2)ATF2野生型过表达组:使用ATF2野生型慢病毒载体转染食管癌KYSE-140细胞系;(3)ATF2 T71A突变型过表达组:使用含有ATF2 T71A突变的慢病毒载体转染食管癌KYSE-140细胞系,其中ATF2突变型基因表达的ATF2蛋白为转录活性受损的蛋白。5.Western Blot检测病毒转染后三组细胞系ATF2蛋白的表达6.使用活细胞动态成像与分析系统IncuCyte Zoom对3组食管癌细胞系进行动态增殖生存分析。7.使用Annexin-FITC-PI凋亡试剂盒处理三组食管癌细胞后使用流式细胞仪检测过表达ATF2细胞周期和细胞凋亡的影响;使用PI染色法处理三组食管癌细胞后使用流式细胞仪分析过表达ATF2对细胞周期的影响。结果1.120例食管癌患者组织mRNA测序:在食管癌组织中ATF2 mRNA表达水平高于癌旁组织对照组(P<0.05)。2.免疫组织化学:ATF2蛋白在食管癌组织中的表达高于癌旁组织对照组(P<0.05)。3.Western Blot检测ATF2在食管癌细胞系中的表达:10种食管癌细胞系中均有ATF2蛋白表达,且在细胞系KYSE-140中表达较低。4.Western Blot检测三组KYSE-140细胞系中ATF2的表达:空白病毒载体转染细胞中ATF2的表达较少,加入ATF2野生型慢病毒载体和ATF2 Thr71A突变的慢病毒载体转染的食管癌细胞中中ATF2均为过表达,证实稳定转染成功。5.病毒载体转染食管癌细胞后,3组食管癌细胞系动态增殖分析:空白对照组的细胞增殖水平高于过表达ATF2的突变组和野生组(P<0.05),过表达ATF2突变组细胞增殖水平高于过表达ATF2野生组(P<0.05)。6.流式细胞仪检测3组细胞细胞周期中G1期、S期和G2期比例变化:ATF2野生型过表达组G2和S期比例高于空白病毒载体转染组和ATF2突变型过表达组,G1期低于空白病毒载体转染组和ATF2突变型过表达组(P<0.05)。ATF2突变型过表达组G1期高于空白病毒载体转染组和ATF2野生型过表达组,S期低于空白病毒载体转染组和ATF2野生型过表达组(P<0.05),ATF2突变型过表达组与空白病毒载体转染组G2期相比没有统计学意义(P>0.05)。7.流式细胞仪进行细胞凋亡水平检测,结果发现ATF2野生型过表达组的凋亡率明显高于空白对照组和ATF2突变型过表达组(P<0.05)。结论1.ATF2 mRNA及ATF2蛋白在食管癌组织中表达均升高。2.ATF2可以促进食管癌细胞凋亡,但同时也促进细胞周期由G1期向S期与G2期转变,综合表现为抑制食管癌细胞生长。