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肺癌是目前常见的恶性肿瘤之一,是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。由于其发病隐袭,恶性程度高,由于肿瘤的转移和多要耐药性,即使采用手术、放疗、化疗等综合治疗手段,5年的存活率仍低于15%。现在研究表明NSCLC的发生、发展、预后与众多的分子事件密切相关,核因子NF-κB的组成性激活与抑癌基因P53的突变和灭活是肺癌发生发展过程中最常见的分子改变。尤其是p53基因,是一种重要的抑癌基因,但在野生型p53状态下为什么还会发生肿瘤?ASPP(Apoptosis Stimulating Protein of p53)家族,尤其是iASPP,对p53诱导细胞凋亡的功能调控,解释了这一问题。ASPP家族共有3个成员:ASPPl,ASPP2和iASPP,三者的C端都含有锚蛋白重复序列(Ankyrin repeats)、SH3结构域(SH3domain),富含脯氨酸的结构域(Proline-rich region)。其中ASPPl和ASPP2与P53结合后能激活P53的抑癌功能,因为iASPP与ASPP1和ASPP2一样,具有相同的与p53结合的区域,故其可通过与ASPP1和ASPP2竞争与p53结合,从而抑制p53的抑癌功能。NF-κB与炎症、免疫反应、创伤、细胞增殖、细胞凋亡以及胚胎发育等重要事件都有着密切联系,现在已知其家族包括5个成员,即RelA(p65)、RelB、c-Rel、p50(NF-κB1)和p52(NF-κB2) ,在所有细胞中均表达。在多种肿瘤中存在NF-κB的活化表达,NF-κB p65是NF-κB的活化组分。到目前为止,NF-κB被激活途径有3种,其主要过程大都是通过磷酸化、泛素化等作用将静息状态下的NF-κB/κB复合体进行加工或分离,暴露NF-κB上的NLS,使NF-κB激活转位于细胞核,与其相对应的靶基因结合,发挥调控基因转录的功能。有研究发现iASPP(RAl)能够与NF2kappaB的单位p65(RelA)结合,抑制NF- kappaB的转录活性,在心脏、胎盘、前列腺等组织中高表达,在肝脏、睾丸组织和白细胞中低表达。但是,非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)中关于iASPP蛋白表达的研究至今相关报道较少。目的:观察核因子-κB ( nuclear factor kappa B, NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)对非小细胞肺癌细胞系A549和NCI-157中ASPP家族中iASPP表达和JNK的影响及其与化疗药(CDDP)的协同抗癌效应的研究,本研究为探讨iASPP和NF-κB之间的相互作用奠定一定的基础。方法:用MTT法筛选两种药物(顺铂,CDDP;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐Ammonium Pyrrolidine dithiocarbam ate ,PDTC)的最小有效浓度,初步检测各药物对A549和NCI157细胞的生长抑制情况;用MTT法筛选出的最小有效浓度处理两种细胞,Western blot方法检测单独用药和联合用药24小时后iASPP的表达变化;单独用药和联合用药处理24小时后,免疫沉淀法检测JNK/SAPK活性。实验数据用SPSS统计软件处理,均数比较用方差分析(ANOVA),P<0.05认为有统计学意义。结果:1.各处理组MTT检测结果显示:CDDP对两细胞株都有生长抑制作用,PDTC对A549生长有抑制作用(P<0.05),对NCI-157的生长有抑制作用(P<0.05),但是PDTC对NCI-157的抑制作用没用良好的药物剂量依赖性。PDTC(12.5μmol/L, 25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L)联合CDDP(6μg/ml)对A549和NCI-157两细胞株的生长均有抑制作用(P<0.05)。2.Western blot方法检测结果显示,用PDTC处理24小时后,两细胞株A549和NCI-157中iASPP蛋白的表达与对照组相比,在A549中iASPP蛋白的表达为0.299±0.093,对照组为0.208±0.082,而在NCI-157中iASPP蛋白的表达为4.078±0.864,对照组为1.685±0.19。3.免疫沉淀结果显示,用PDTC、CDDP和PDTC+CDDP处理A549和NCI-157细胞后,这三种药物可以激活A549中JNK/SAPK活性,磷酸化的c-Jun表达更高,但在NCI-157中只有CDDP可以激活JNK/SAPK的活性,PDTC和PDTC+CDDP则对JNK/SAPK活化有一定的抑制作用。结论:1.本实验选取两种细胞株A549和NCI-157,MTT显示用PDTC、CDDP和联合用药后(顺铂浓度固定),PDTC与CDDP之间具有协同作用,可以增加非小细胞肺癌对化疗药物(CDDP)的敏感性。2.核因子κB ( nuclear factor kappa B, NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)能够增加A549和NCI-157的iASPP蛋白的表达。3.实验所用药物PDTC对两细胞A549和NCI-157的JNK活性有着不同的影响。