类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性关节滑膜炎症性疾病,严重时可导致关节功能丧失,目前全球的发病率高达0.8%。RA的发病原因尚未明确,中医定义RA为“痹症”,是由于人体正气不足、防御能力减弱而被风寒湿热之邪侵犯所引起的。西医定义RA发病可能与遗传、感染、性激素等因素有关。类叶牡丹(Caulophyllum robustum Maxim.)为小檗科红毛七属植物,又名红毛七、威严仙等,根及根茎是其主要的药用部分。早在民间,类叶牡丹就有诸多的药用价值,如用于致疗风湿痹痛、跌打损伤、月经不调,止血、降血压、抗炎等。现代化学及药理表明三萜皂苷和生物碱是类叶牡丹主要的化学成分。已有研究报道,类叶牡丹含有抗RA的有效成分,但其作用机制尚不明确。因此本文对类叶牡丹抗RA有效部位进行了药效学研究,具体研究如下:1.类叶牡丹抗RA有效部位最小有效浓度(阈浓度)考察目的:通过大鼠角叉菜胶左后足急性炎症实与小鼠热板实验验考察类叶牡丹抗RA有效部位的最小有效浓度。方法:灌胃给予昆明(KM)小鼠类叶牡丹抗RA有效部位极低剂量(12.5mg/kg)、低剂量(25 mg/kg)、中剂量(50mg/kg)、高剂量(100mg/kg),雷公藤(0.01mg/g),阿司匹林(0.4mg/g),给药7d,各组分别在末次给药后0.5h、1h、2h、4h、6h用恒温可控热板仪测定各组KM小鼠痛阈值;灌胃给予SD大鼠类叶牡丹抗RA有效部位极低剂量(8.65mg/kg)、低剂量(17.31mg/kg)、中剂量(34.62mg/kg)、高剂量(69.23mg/kg),雷公藤(7.88mg/kg),甲氨蝶呤(0.68mg/kg),给药7d后,利用角叉菜胶给各组大鼠左后足致炎;各组分别在致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h利用足容积测定仪测定各组SD大鼠的足肿胀度。结果:在SD大鼠急性炎症实验中,类叶牡丹抗RA有效部位极低剂量(12.5mg/kg)在各检测时间点的足肿胀度与模型组比较,p>0.05,差异不显著,而低剂量组(25mg/kg)、中剂量组(50mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)大鼠分别在2h、1h、0.5h就表现出肿胀度减轻;在KM小鼠热板实验中,类叶牡丹抗RA有效部位极低剂量(8.65mg/kg)在各检测时间点的足痛阈值与空白组比较,p>0.05,差异不显著,而低剂量组(17.31mg/kg)、中剂量组(34.62mg/kg)、高剂量组(69.23mg/kg)大鼠分别在1h、0.5h就表现出组痛阈值变大。结论:由SD大鼠急性炎症实验与KM小鼠热板实验结果,确定抗炎实验的起效剂量为25mg/kg,镇痛实验的起效剂量为17.3 1mg/kg。2.类叶牡丹抗RA有效部位对AIA大鼠的致疗作用及血清细胞因子的影响目的:观察类叶牡丹抗RA有效部位对患有RA疾病的SD大鼠的致疗作用及血清细胞因子的影响。方法:建立SD大鼠AIA模型,各组大鼠(除空白组、模型组)经类叶牡丹抗RA有效部位低、中、高剂量致疗阶段,在不同的时间点观察并记录各组大鼠一般状态,体重,原发性足肿胀程度,并于末次给药后,利用ELISA方法检测各组大鼠血清细胞因子IL-17、G-CSF、IFN-γ、TGF-β的含量。结果:在给药后,各组大鼠(除空白组、模型组)原发侧足肿胀程度明显缓解,缓解程度由大道小为:类叶牡丹抗RA有效部位高剂量组>雷公藤组>中剂量组>甲氨蝶呤组>低剂量组;末次给药后,检测各组大鼠血清细胞因子发现,类叶牡丹抗RA有效部位抑制血清IL-17、血清G-CSF、血清IFN-丫、血清TGF-β的含量。结论:类叶牡丹抗RA的作用机制可能是抑制了血清IL-17、血清G-CSF、血清IFN-γ、血清TGF-β的增殖,从而减轻了AIA模型大鼠的足肿胀度,起到抗RA的作用。3.类叶牡丹抗RA有效部位对KM小鼠免疫功能的研究目的:观察类叶牡丹抗RA有效部位对小鼠免疫功能的影响。方法:灌胃给予KM小鼠类叶牡丹抗RA有效部位低剂量(25 mg·kg-1)、中剂量(50 mg·kg-1)、高剂量(100 mg·kg-1)7d后,分别通过碳粒廓清法、小鼠溶血素抗体生成法、2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应法(DTH)并结合流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组小鼠的碳粒廓清指数(K)和吞噬系数(a)、血清溶血素半数溶血值HC50、小鼠耳廓肿胀度及外周血中淋巴细胞各亚群比例。结果:三种剂量均能明显减小碳粒廓清指数(K)和吞噬系数(a),抑制单核巨噬细胞的吞噬功能(p<0.05);亦能抑制DNFB诱导的小鼠DTH,且淋巴细胞各亚群中CD3+、CD4+在一定程度上减少,CD8+明显增加,CD4+/CD8+比值显著降低(p<0.05)。同时可降低血清溶血素含量,且低剂量组的抑制作用明显弱于中、高剂量组。结论:类叶牡丹抗RA有效部位对小鼠的免疫功能具有抑制作用。综上,本文确定了类叶牡丹抗RA有效部位的最低起效剂量,在此基础上证明了类叶牡丹抗RA有效部位可能是通过抑制血清IL-17、血清G-CSF、血清IFN-γ、血清TGF-β的增殖来起到抗RA的作用,并且还通过碳粒廓清实验、小鼠溶血素抗体生成实验、2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应实验(DTH)等三个免疫相关实验进一步证明了类叶牡丹抗RA有效部位具有免疫抑制作用。以上研究结成果为类叶牡丹抗RA有效部位进一步开发利用和进行新药创新奠定基础。