论文部分内容阅读
模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)是识别微生物表面病原体相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)的一类先天免疫分子，肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)家族是PRRs一员可识别细菌肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)。PGRPs在无脊椎动物和脊椎动物中高度保守，如软体动物。本研究采用5′、3′RACE技术，对高通量转录组测序所得三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)PGRP-S(hcPGRP-S)和PGRP-L(hcPGRP-L)基因部分片段分别进行了5′、3′末端克隆，经拼接得到hcPGRP-S和hcPGRP-L cDNA序列全长，并采用实时荧光相对定量(qRT-PCR)技术检测了其组织表达分布，及经肽聚糖和脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)刺激后在肝胰腺中的表达变化。 hcPGRP-S基因cDNA全长1438 bp，开放阅读框长858 bp，编码285氨基酸(aa)，预测分子量大小为32.3 ku，理论等点为7.98，无信号肽和跨膜结构。与其他物种PGRPs氨基酸序列多重比对发现，hcPGRP-S氨基酸序列与夏威夷短尾鱿鱼PGRP4同源性最高(51％)，而与牛PGLYRP3同源性最低(33%)。qRT-PCR检测结果表明，hcPGRP-S在性腺、肝胰腺、鳃、心脏及外套膜均有表达，性腺中表达水平最高。经PGN或LPS注射刺激后，肝胰腺中hcPGRP-S表达水平显著上调，表明hcPGRP-S可能在三角帆蚌的肝胰腺抗菌免疫反应中发挥重要作用。 hcPGRP-L基因cDNA序列全长1716 bp，开放阅读框长1263 bp，编码420 aa，预测蛋白分子量大小为48.24 ku，理论等电点为8.58，预测有4个潜在N-糖基化位点，分别为N67QT、N99KS、N193LT和N229SS，有PGRP结构域(aa249-391)，hcPGRP-L无信号肽和跨膜螺旋结构。氨基酸序列多重比对发现，hcPGRP-L氨基酸序列与三角帆蚌PGRP-1a、PGRP-S、PGRP-S1和PGRP-S2同一性分别为57%、62%、53%和56%。hcPGRP-L在性腺、肝胰腺、鳃、心脏及外套膜均有表达，而在性腺中表达最高。经PGN注射刺激后，肝胰腺中hcPGRP-L表达水平显著上调，而LPS刺激后hcPGRP-L表达水平无显著变化。