siRNA沉默COX-2基因协同紫草素对胃癌细胞转移的影响

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目的:通过紫草素协同siRNA干扰胃癌细胞中COX-2基因,观察并探讨紫草素对胃癌细胞COX-2基因和VEGF-C基因表达以及胃癌细胞侵袭力和迁移能力的影响,研究紫草素协同siRNA抗癌细胞转移的可能机制,为中药紫草的抗癌应用提供新的研究思路。方法:将生长状态良好的胃癌细胞BGC-823和SGC-7901细胞分为:空白组、阴性对照组、紫草素协同组、siRNA干扰组、紫草素组;利用siRNA沉默及紫草素协同干扰胃癌细胞的COX-2基因,RT-PCR检测BGC-823和SGC-7901各组细胞中COX-2基因和VEGF-C基因mRNA水平的表达变化;免疫荧光方法从蛋白质水平检测BGC-823和SGC-7901各组细胞中COX-2和VEGF-C基因的表达。细胞划痕实验检测BGC-823和SGC-7901细胞siRNA干扰以及紫草素处理前后细胞迁移能力的变化;Transwell实验检测siRNA干扰前后以及紫草素协同siRNA组对胃癌细胞侵袭力的影响。结果:胃癌细胞BGC-823和SGC-7901在siRNA干扰前后,细胞状态无明显变化。(1)、RT-PCR结果显示:空白组和阴性对照组细胞两因子表达无明显差异(P>0.05);与空白组和阴性对照组比较,siRNA干扰组、紫草素协同组BGC-823和SGC-7901细胞中COX-2基因和VEGF-C基因的mRNA含量明显降低(P<0.05),两株胃癌细胞紫草素干扰组中VEGF-C基因mRNA含量无明显下降(P>0.05);与siRNA干扰组比较,紫草素协同组细胞VEGF-C基因mRNA的表达量无显著性差异(P>0.05),紫草素协同组细胞COX-2基因mRNA有明显差异,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)、细胞免疫荧光实验结果显示:两株细胞空白组和阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05);与空白组和阴性对照组比较发现,siRNA干扰组和紫草素协同组胃癌细胞的COX-2和VEGF-C基因蛋白水平表达有明显下降(P<0.05),两组间VEGF-C基因的表达无显著性差异(P>0.05),COX-2基因的表达变化差异具有统计学意义(P<0.05);紫草素组胃癌细胞中COX-2基因表达量明显下降(P<0.05),差异具有统计学意义;与空白组比较,紫草素组内细胞VEGF-C的表达则无显著性差异(P>0.05)。(3)、细胞划痕实验结果显示:与空白组比较发现,紫草素协同组、siRNA干扰组以及紫草素组细胞的迁移能力有下降趋势;Transwell实验结果显示:两株细胞空白组和阴性对照组迁移细胞数量无明显差异(P>0.05);与空白对照组比较,siRNA干扰组和紫草素协同组细胞的侵袭力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05),紫草素组则无明显差异(P>0.05),结论:siRNA能够成功沉默胃癌细胞BGC-823和SGC-7901细胞中COX-2基因的表达。紫草素能够在一定程度上抑制BGC-823和SGC-7901细胞总COX-2基因的表达,但对VEGF-C基因作用不明显;与siRNA协同干扰胃癌细胞后,则对两因子具有明显的抑制作用。紫草素可能通过影响细胞内COX-2基因的表达,抑制胃癌细胞的侵袭力,进一步抑制肿瘤细胞转移的迁移的作用。
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