侵染番木瓜的双生病毒基因克隆及生物学鉴定

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该文对广州天河侵染番木瓜的双生病毒(Geminivirus)进行了研究.从田间番木瓜上采集了各种病毒样本(Guangzhou-Tianhe,GT),用双生病毒简并引物PA、PB对番木瓜样本进行特异性的PCR检测,结果发现,所有可疑样品均出现约500bp的条带,说明这些番木瓜上存在双生病毒.PCR产物克隆测序后与已报道的番木瓜双生病毒序列进行比较发现,GT与中国番木瓜曲叶病毒(Papaya Leaf Curl China Virus,PaLCV)分离物GD2的核苷酸序列同源性大于98%,而与中国番木瓜曲叶病毒分离物G2、G8、G12、G30、G10等的同源性均低于77%.因此,推测GT样本与GD2可能是同一种病毒.对GT样本的DNA-A进行了DNA序列测定.GT DNA-A全长2769个核苷酸,其DNA-A基因组结构具有典型的粉虱传双生病毒特点:共编码6个开放阅读框架(ORF),其中病毒链编码AV1(CP)和AV2两个ORF,互补链编码AC1(Rep)、AC2、AC3和AC4四个ORF.而同源性和系统进化树分析得知,GTDNA-A与中国番木瓜曲叶病毒分离物GD2的同源性达96.7%,属同一进化分支.说明GT与GD2是中国番木瓜曲叶病毒同种病毒的不同分离物.该研究初步鉴定了GT病毒样本的生物学特性.采用机械摩擦、微量注射和烟粉虱传毒三种接毒方式,对菜豆、辣椒、黄瓜、西葫芦、烟草及番木瓜等多种作物进行了接毒试验.结果表明:机械摩擦无法接毒;后两种接毒方式均在心叶烟、普通烟及番木瓜的"穗中红"、"美中红"、"台5"等供试植物上成功传毒,PCR检测呈阳性,而在其它作物即菜豆、辣椒、西葫芦、黄瓜和南瓜上未出现相应症状,PCR检测呈阴性.同时发现,少量多次注射植株叶脉、韧皮部传毒效果更佳;在烟粉虱传毒试验中,烟粉虱获毒在2~24小时之间,随时间延长传毒效率提高.
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