论文部分内容阅读
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,紫杉醇是乳腺癌治疗中常用的化疗药物,而化疗耐药则是临床上乳腺癌治疗的主要障碍和亟需解决的难题。ERa在超过60%的乳腺癌细胞中表达,其在乳腺癌耐药中的作用也日益显现。DNA甲基化由IDNMT1、DNMT3a和DNMT3b共同催化和维持,DNMTs的异常表达可以改变肿瘤细胞对化疗药物的反应性,并且DNA甲基化异常也与肿瘤耐药密切相关。我们通过生物信息学软件预测到DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因的启动子区均存在雌激素反应元件,并且实验室前期诱导得到的MCF-7紫杉醇耐药株中ERα、DNMT1和DNMT3b表达水平均升高,同时我们也已经证实ERa可以上调DNMT1基因的转录活性。因此我们认为ERa可以通过调节甲基转移酶的表达影响MCF-7细胞对紫杉醇的耐药性。我们利用报告基因系统、RT-PCR、Western blot、ChIP和MTT实验检测了ERa对DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的表达以及MCF-7细胞对紫杉醇耐药性的影响。实验结果表明ERa可以直接结合在DNMTl和DNMT3b基因的启动子区增加DNMT1和DNMT3b的转录活性。干扰ERa可以显著抑制DNMT1和DNMT3b的表达。ERa介导的DNMT1和DNMT3b上调可以增加MCF-7细胞对紫杉醇的耐药性。干扰DNMT1或DNMT3b都可以部分逆转ERa过表达的效应。雌激素处理可以激活ERa,增加ERα与DNMT1和DNMT3b启动子区的结合,上调DNMT1和DNMT3b的表达。此外,MSP实验证实DNM T1可以介导MCF-7细胞全基因组甲基化水平的升高。我们的研究结果首次证实ERa可以通过直接上调I)NMT1和DNMT3b的表达增加乳腺癌MCF-7细胞对紫杉醇的耐药性,为临床上克服肿瘤耐药提供了新的思路。