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背景与目的多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)是B淋巴细胞起源的单克隆浆细胞血液系统恶性肿瘤,以骨髓(bone marrow,BM)中浆细胞异常克隆增殖为特征。患者血清中存在大量单克隆性免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)的分泌和沉积,随着大量的Ig或其免疫球蛋白片段的合成,可抑制正常Ig的分泌。此外尚可造成患者肾脏、骨骼等组织或靶器官的损伤。MM发病率约占所有肿瘤的1%,约占血液系统恶性肿瘤的10%,多发于老年人,约2/3的初诊患者年龄超过65岁。随着我国社会老龄化程度加剧,65岁以上老年人口逐年攀升,MM的发病人数亦呈增加趋势。MM起病的表现包括多发病理性骨折、骨痛、肾功能不全、贫血以及免疫力低下等。研究表明,MM的发生与表观遗传学异常关系密切,表观遗传学异常可引起基因或蛋白表达异常,这些异常在MM的发生发展中起着举足轻重的作用。相当一部分MM患者伴随肿瘤抑制基因的沉默,这部分基因通过表观遗传学调控方式,包括组蛋白修饰、DNA甲基化、长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)等方式对基因表达进行调控,参与MM的发生发展过程。其中,DNA的异常甲基化(DNA甲基化不平衡),被认为是多种肿瘤的发生的重要因素。本实验从组蛋白甲基化与长链非编码RNA(lnc RNA)相互作用角度出发,探讨多MM细胞发生凋亡逃逸的具体机制。从而进一步阐明lnc RNA与其他表观遗传形式的相互作用,为以lnc RNA为靶点的MM基因诊断与基因治疗寻找新的契机。方法MTT法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术检测下调组蛋白H3第27位赖氨酸上三甲基化H3K27me3的表达对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡程度的影响;RT-PCR法检测RPMI8226细胞中人母系表达基因(MEG3)lnc RNA及鼠双微体基因2(murine doubleminute 2,MDM2)的m RNA表达;Western blot法检测RPMI8226细胞中EZH2(Enhancer of Zeste Homolog2,Zeste基因增强子同原物2)、H3K27me3、MDM2及p53蛋白表达;Ch IP Real-time PCR检测RPMI8226细胞中H3K27me3的结合位点。结果下调H3K27me3可诱导RPMI8226细胞发生凋亡;H3K27me3可直接结合于MEG3lnc RNA启动子;H3K27me3抑制可上调RPMI8226细胞中MEG3lnc RNA表达;RPMI8226经MEG3lnc RNA小干扰RNA(MEG3lnc RNA-si RNA)干预后,细胞内MDM2 m RNA水平明显升高,并伴随MDM2蛋白表达上调。给予MDM2拮抗剂后,细胞内Ub-p53表达水平降低,p53的降解过程被抑制。结论抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞中EZH2的表达可使H3K27me3表达量显著下降,同时细胞凋亡率明显增加。MM中H3K27me3结合MEG3 lnc RNA启动子,MEG3lnc RNA启动子H3K27me3高表达导致MEG3 lnc RNA表达缺失。MEG3lnc RNA表达缺失可解除MDM2的抑制,MDM2与p53的结合可促进p53泛素化过程,进而促进p53降解加速,最终诱导细胞发生凋亡逃逸。