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背景中国食管癌发病数约占全球食管癌发病总数的50%,是危害人民群众健康的主要恶性疾病。鳞癌是中国食管癌的主要病理分型,约占90%以上,发病呈地域性分布,主要分布在农村及贫困山区,是当地人民群众因病致贫及因病返贫的主要因素,同时也是制约当地社会经济发展的重要原因。食管癌治疗手段以手术、放疗和化疗为主,可是治疗的远期效果并不容乐观,患者生存质量极差,因为缺乏有效早期的预防及诊疗手段,多半食管癌诊断时已属于晚期,随着对肿瘤的免疫逃逸机制的研究进一步深入,免疫治疗被认为是肿瘤防治新选择。因此,寻找促进食管癌发生、发展的新靶点变得十分重要。T细胞活化过程中需“双重信号”及各种因子共同参与。T细胞表面受体(T cell receptor,TCR)可识别由抗原提呈细胞(antigen-presenting cells,APCs)提呈的抗原肽-主要组织相容性复合体,将胞外信号传递到胞内,为T细胞的活化提供第一信号,初步激活T细胞。APC表面的协同刺激分子可与T细胞表面的配体结合,提供第二活化信号,使初始T细胞完全活化为效应T细胞。协同刺激分子有3种分类:B7家族、TNF家族和细胞因子家族。而且仅B7族可通过APC传达相关信号给T细胞的协同刺激分子。目前B7家族共包括7个成员:B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、B7h(ICOS-L)、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H3和B7-H4(B7x、B7S1)。与B7族其他分子不一样,B7-H1具有负性调节免疫应答的作用。PDL1(programmed death-ligand 1程序性死亡配体1)是位于人染色体9q24的跨膜蛋白,胞外区有IgV和IgC样结构的,中间区有疏水结构,胞外区含有蛋白激酶C磷酸化位点,PDL1在多种正常组织中表达,但仅限于巨噬细胞系统中,研究发现许多恶性肿瘤中PDL1高表达,包括非小细胞肺癌、黑色素瘤、乳腺肿瘤、胶质瘤等。PD1(programmed death-1程序性死亡分子1 CD279)为CD28家族成员,由胞外段、疏水跨膜区、胞内段组成。胞内区含有2个酪氨酸残基,包括免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif,ITIM)、免疫受体酪氨酸转换基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif,ITSM),TISM的激活与效应T细胞的的应答活性密切相关。PD-1可在于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞及单核细胞表面,同时也可在调节性T细胞(regulatory T cell Treg)检测到,促进Treg细胞的增殖,抑制免疫应答。PD1包括两个配体PDL1及PDL2,而PDL1是PD1的主要配体。PD1与PDL1结合后,ITSM可募集酪氨酸磷酸酶,进而去磷酸化TCR信号通路的多个关键分子,抑制T细胞的增值活化,发挥免疫负性调节功能,减少免疫反应对周边组织的损害,避免自身免疫的发生。肿瘤组织高表达PDL1,该信号通路的激活可促进肿瘤免疫逃逸。肿瘤逃逸的机制可能与以下的原因有关:(1)诱导T细胞耐受;(2)诱导T细胞凋亡;(3)诱导T细胞耗竭;(4)增强Treg细胞功能;(5)抑制T细胞的增殖。第一部分PDL1在食管鳞癌中的表达及临床意义目的研究PDL1在食管鳞癌中的表达及临床意义方法收集河南科技大学第四附属医院2014年1月-2014年6月食管鳞癌患者的癌组织及相应癌旁组织,采用免疫组化、Western blot实验方法检测PDL在癌组织及相应癌旁组织的表达,并分析PDL1的表达与食管鳞癌临床病理学特性的关系及预后的相关性。结果在食管鳞癌组织中PDL1的阳性率为42.0%高于癌旁组织的22.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。PDL1的表达水平与临床分期和肿瘤浸润深度有一定相关性(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明PDL1的阳性组较阴性组预后较差,30个月生存率分别为38.1%、86.2%,差异有统计学意义(P<0.05)。多变量COX回归分析表明PDL1是食管鳞癌患者的独立预后因素。结论PDL1在食管鳞癌的发生发展过程起到重要作用,可能成为食管鳞癌评价预后指标,并为食管鳞癌的治疗提供新的靶点。第二部分PDL1对食管癌细胞生物学特性的影响目的研究PDL1的表达对食管癌细胞生物学特性的影响。方法1.应用CCK8实验和平板克隆实验,检测PDL1对人食管癌细胞株EC109体外增殖能力的影响。2.应用Wound-healing实验和Transwell小室实验,检测PDL1对人食管癌细胞株EC109细胞迁移和侵袭能力的影响。3.应用裸鼠移植瘤模型观察PDL1对人食管癌细胞株EC109细胞体内增殖的影响。结果1.CCK8实验和平板克隆实验结果显示,实验组与对照组体外增殖力无明显差异(P>0.05)。提示PDL1的表达对食管癌细胞的体外增殖力没有明显影响。2.Wound-healing实验结果显示,实验组迁移能力明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。提示PDL1的表达可增强食管癌细胞的迁移能力。3.Transwell实验结果显示,实验组的侵袭能力明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。提示PDL1的表达能增强食管癌细胞的侵袭能力。4.裸鼠移植瘤实验结果显示,实验组与对照组体内增殖能力无明显差异(P>0.05)。提示PDL1的表达对食管癌细胞的体内增殖能力没有明显影响。结论PDL1对食管癌细胞的增殖能力没有影响,但能增强食管癌细胞的迁移、侵袭能力。