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实验目的双歧杆菌是人和动物肠道内重要的生理菌,其表面分子脂磷壁酸(Lipoteichoic acid ,LTA)已被证实具有抗氧化的作用,能够有效延缓衰老,但其机制并不是很清楚。本研究用H2O2诱导人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38出现“应激诱导早熟性老化”(stress-induced premature senescence,SIPS),观察双歧杆菌LTA是否具有对抗H2O2诱导细胞衰老的作用,以及WI-38细胞中p21、CDK2和cyclin E mRNA和蛋白表达水平的变化,初步探讨双歧杆菌LTA抗细胞衰老的细胞周期调控机制。实验方法1.采用噻唑兰比色(MTT)法检测经双歧杆菌LTA处理前后,人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38生存率影响的变化;用亚致死量的H2O2诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶细胞化学染色检测衰老细胞,计算其阳性百分率并检测经双歧杆菌LTA处理前后对β-半乳糖苷酶细胞化学染色阳性百分率的变化。2.双歧杆菌LTA体外作用人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38后,用RT-PCR检测衰老相关指标p21、cyclin E和CDK2的mRNA水平变化,Western blot分析p21、cyclin E和CDK2蛋白水平的变化。实验结果1.经双歧杆菌LTA作用后,人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38的生存率增高并且β-半乳糖苷酶细胞化学染色阳性率降低。2.经双歧杆菌LTA作用后,WI-38细胞中与衰老相关的p21的mRNA及蛋白表达水平下降;cyclin E和CDK2的mRNA及蛋白表达水平升高。实验结论1.双歧杆菌LTA能抑制H2O2对WI-38细胞氧化损伤作用,抑制H2O2对WI-38细胞诱导衰老的作用。2.双歧杆菌LTA能明显下调WI-38细胞中p21的mRNA和蛋白质的表达;上调WI-38细胞中cyclin E和CDK2的mRNA及蛋白表达水平。