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慢性髓细胞性白血病(chronic myelognous leukemia，CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性增殖性疾病，干扰素-α(IFN-α)是治疗CML的最有效制剂之一，但是干扰素耐药比率也很高。本实验室运用蛋白质学方法分别比较分析发现IFN-α耐药株KT-1／A3R细胞高表达GST pi蛋白，然而IFN-α敏感株KT-1／A3细胞几乎不表达此蛋白，运用半定量RT-PCR和Western blotting也同样证明上述结论。先前研究还证明IFN-α诱导A3细胞的细胞凋亡增加显著，bcr／ab1融合基因相应表达下调；而抗性株细胞凋亡不明显，bcr／ab1融合基因表达下调也不明显。以上研究表明GSTP1基因可能在A3R细胞对IFN-α的耐受机制中发挥着重要的作用。本实验旨在通过应用RNAi，抑制A3R细胞中GSTP1基因的表达，从而增强IFN-α通过bcr／ab1融合基因的作用而诱导的KT-1／A3R细胞凋亡，部分逆转A3R细胞对IFN-α的耐药性。目的初步探讨GSTP1在肿瘤细胞增殖及抵抗细胞凋亡中的作用，为研究IFN-α对CML的耐药机制提供新的思路。方法1．选择目标序列，设计并合成针对GSTP1基因siRNA模板，构建siRNA表达载体pSilencer-GSTP1-A和pSilencer-GSTP1-B；2．转染针对GSTP1基因的两对干扰质粒，采用半定量RT-PCR和Western blotting实验验证干扰的效果；3．A3R细胞经转染干扰质粒pSilencer-GSTP1-A及在IFN-α诱导下，流式细胞术检测48 h及72 h细胞凋亡率，用台盼蓝拒染法计24 h～96 h细胞数，MTT法测定24h～96 h细胞吸光度值，半定量RT-PCR测定48 h bcr／ab1 mRNA表达变化，同时设置未转染组及转染空白质粒组与之相比较，并且统计学分析以上结果。结果1．质粒与脂质体1∶4(质量／体积)比例混合转染48 h，发现经pSilencer-GSTP1-A干扰后A3R细胞中GSTP1基因表达下降约78％，蛋白表达下降约71％，经pSilencer-GSTP1-B干扰后A3R细胞GSTP1基因表达下降约53％，蛋白表达下降约50％；2．经pSilencer-GSTP1-A干扰后，与转染空白质粒组相比较，A3R细胞凋亡率48 h增加约4.53％，72 h增加约5.71％；台盼蓝拒染法：A3R细胞生长抑制率24 h～96 h分别约为4.56％、5.94％、5.83％、5.16％：MTT法：A3R细胞生长抑制率24 h～96 h分别约为4.48％、5.48％、6.06％、4.62％；RT-PCR测定48 h bcr／ab1基因表达下调约26％。结论1．成功构建了两干扰质粒pSilencer-GSTP1-A和pSilencer-GSTP1-B，而且质粒干扰效果前者强于后者；2．A3R细胞经质粒pSilencer-GSTP1-A干扰后能显著增强IFN-α诱导的细胞凋亡(P＜0.05)，但只能轻度抑制细胞生长(P＞0.05)；3．GSTP1基因的表达下调，可能促进IFN-α诱导的bcr／ab1基因表达下调，而且通过这一机制也可能会最终导致细胞凋亡的增加。