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本文从地衣芽孢杆菌中克隆得到了一个新的酚酸脱羧酶基因(blpad),并在大肠杆菌中实现了超表达。该基因编码的蛋白(BLPAD)含有166个氨基酸,其理论分子量为19.521KDa,理论等电点为5.02。该重组酶最适温度为37℃,最适pH为6.0。该酶能以对香豆酸、阿魏酸、咖啡酸以及芥子酸为底物,且以它们为底物时的比酶活比例为100:74.59:34.41:0.29。动力学分析发现该酶对这四种底物的Km值分别为1.64,1.55,1.93以及2.45 mM,Vmax值分别为268.43,216.80,119.07以及0.78 IU/mg。与其它酚酸脱羧酶相比,该酶具有突出的有机溶剂耐受性及热稳定性。在两相体系中,在甲苯及环己烷存在条件下,该酶转化对香豆酸及阿魏酸生成4-乙烯基苯酚及4-乙烯基愈创木酚时表现出很高的催化能力。在对香豆酸及阿魏酸浓度达到500 mM时,该酶对它们的转化率分别达到了97.02%和75.02%,且体系中4-乙烯基苯酚及4-乙烯基愈创木酚的终浓度分别达到了58.28 g/L和56.33g/L。固定化酶Ni-NTA-BLPAD在底物浓度为50及100 mM时重复利用五次后,转化率仍能达到90%以上。两相体系的分子毒性研究发现,底物浓度、水相中残余有机溶剂及产物对BLPAD的活性均有一定的抑制作用。在实际应用中,低转化率及低产物浓度一直是利用酚酸脱羧酶生产4-乙烯基酚类物质的不足之处。本实验中的地衣芽孢杆菌酚酸脱羧酶BLPAD所具有的特殊性质使其在应用两相体系生产4-乙烯基酚类物质的工业化应用中有很大的潜力,另外根据对两相体系限制因素及固定化酶的研究结果,我们也可以对两相体系进行一些设计,降低其不良影响,使其更适合工业应用。