论文部分内容阅读
目的：观察盐霉素对DU145荷瘤NOD/SCID小鼠移植瘤生长的影响，探讨盐霉素体内抑制肿瘤细胞增殖及其可能的机制。 方法：培养人前列腺癌DU145细胞至对数生长期，制备1×106/0.1ml单细胞悬液注射到60只NOD/SCID小鼠右前肢侧腹部皮下，观察成瘤情况。将成瘤后肿瘤大小基本一致的54只小鼠随机分为6组：A组:阴性对照组；B：溶媒（二甲基亚砜溶液）处理组；C组:阳性对照组（紫杉醇10mg/Kg.d）；D组：盐霉素2.5mg/Kg.d；E组：盐霉素5mg/Kg.d；F组：盐霉素10mg/Kg.d；每组9只小鼠。给药方式均为腹腔注射给药，每日两次。给药28天后，处死小鼠。①测量各组移植瘤的大小及瘤重，计算抑瘤率。② HE染色后显微镜下观察肿瘤细胞形态并行免疫组化检测证实肿瘤来源。③用CD133、CD44抗体标记后采用流式细胞仪鉴定各实验组肿瘤干细胞比例，分析盐霉素对前列腺癌干细胞的作用效果。④采用microarray及RT-PCR技术定性、定量检测各组前列腺肿瘤干细胞的全基因表达谱，并采用Treeview软件对各组基因进行差异性分析，筛选出与盐霉素作用最具相关性的靶基因。 结果：①成瘤情况:接种60只小鼠，58只成瘤，成瘤率96.7％。②各组移植瘤体积、瘤重为：A880.12±168.59mm3、0.82±0.29g；B879.72±198.13mm3、0.81±0.36g；C151.48±83.34mm3、0.13±0.11g；D427.53±95.43mm3、0.39±0.23g；E352.65±61.30mm3、0.35±0.15g；F292.01±61.50mm3、0.33±0.13g。阳性对照组及各盐霉素作用组与阴性对照组间，阳性对照组及各盐霉素作用组之间两两比较，差异都具有显著性（P<0.05）。溶媒作用组与阴性对照组之间比较，差异不具有统计学意义（P>0.05）。③病理及免疫组化检测情况。HE染色显微镜下观察：各盐霉素作用组细胞数量减少、体积变小、胞质浓缩。免疫组化证实是来源于前列腺的肿瘤。④流式细胞仪鉴定各组中肿瘤干细胞的比例为：A组1.62±0.37%，B组1.62±0.46%，C组1.62±0.35%，D组1.39±0.29%，E组1.13±0.28%，F组0.43±0.21%。各盐霉素作用组与阴性对照组之间、各盐霉素作用组之间比较，差异都具有统计学意义（P<0.05），且随着盐霉素浓度的增加，肿瘤干细胞的比例愈小；溶媒对照组与阴性对照组比较差异不具有统计学意义（P>0.05）。⑤各盐霉素作用组与阴性对照组肿瘤干细胞全基因表达谱比较，各盐霉素作用组表达均上调的基因有11个，表达均下调的基因有9个，其中ATP2A3基因的表达上调及PRKCG基因表达下调可能与盐霉素抗肿瘤效应有关。 结论：①1×106/0.1mlDU145单细胞悬液在NOD/SCID小鼠的侧腹部皮下种植有较好的成瘤性。②盐霉素能有效抑制人前列腺癌DU145荷瘤NOD/SCID小鼠移植瘤生长，作用呈剂量依赖性。③盐霉素对DU145荷瘤NOD/SCID免疫缺陷鼠的肿瘤干细胞有抑制作用,作用呈剂量依赖性。④盐霉素诱导DU145荷瘤小鼠肿瘤干细胞凋亡的机制可能与其上调ATP2A3基因及下调PRKCG基因的表达有关。