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目的血脑屏障由脑微血管内皮细胞,基底膜和星型胶质细胞的足突构成,能够阻隔大分子物质自由通过。由于具有血脑屏障,并且缺乏淋巴管,中枢神经系统长期以来被认为是一个免疫豁免器官,不被免疫系统所监视。然而,近年的研究表明,CNS在生理状态下同样有免疫细胞的时常“光临”,免疫细胞具有穿过血脑屏障的能力。阿尔茨海默病是引起老年人群痴呆的最常见原因,并随着人类寿命的延长,发病率呈明显增高趋势,患者通常在发病后5-6年内死于继发感染和全身衰竭。AD的发病机制中,脑内淀粉样蛋白沉积与斑块形成具有重要作用,也是AD最显著的病理特征。近年研究表明,炎症在AD发病中起着至关重要的作用。AD患者脑实质内存在Aβ反应性T淋巴细胞,其数量与同年龄对照组相比,具有显著的统计学意义。但外周血T淋巴细胞是如何活化并穿越血脑屏障进入脑实质内的,目前尚不清楚。本研究室陈誉华课题组发现AD病人外周血T淋巴细胞穿过血脑屏障体外模型能力显著高于同龄对照人群。使用基因芯片对AD患者外周血T淋巴细胞分析结果表明其CXCR2受体表达明显增高。但CXCR2受体在T淋巴细胞跨血脑屏障过程中发挥着怎样的作用,目前仍不清楚。CXCR2受体是细胞因子受体家族的重要一员,与其配体IL-8作用能够趋化淋巴细胞、单核巨噬细胞以及中性粒细胞等炎症细胞发生体内外的迁移。本研究旨在通过模拟AD患者体内微环境,对Aβ沉积、T细胞高表达CXCR2,T细胞迁移入脑之间的关系做以研究和阐述。方法1、探讨AD患者外周血T淋巴细胞高表达CXCR2与其跨内皮迁移能力之间的关系（1）Real-time PCR检测AD患者外周血T淋巴细胞CXCR2受体表达水平。（2）构建含有BV2小胶质细胞的体外血脑屏障模型,模拟AD脑微环境对AD患者外周血T淋巴细胞及Jurkat、6T-CEM淋巴细胞系进行迁移分析,并使用CXCR2中和抗体进行抗体封闭实验。2、探讨Aβ反应性小胶质细胞引起的脑微血管内皮细胞IL-8表达上调在T淋巴细胞跨内皮迁移过程中的作用（1）使用Aβ刺激的BV2培养上清作用HBMECs后,使用Real-time PCR、ELISA检测IL-8水平。（2）使用IL-8中和抗体及siRNA干扰HBMECs IL-8,对AD患者T淋巴细胞及Jurkat进行迁移分析及黏附分析。（3）构建Aβ1-42脑内沉积动物模型,Real-time PCR检测外周血T淋巴细胞CXCR2水平,免疫荧光检测脑微血管内皮细胞CINC-1（大鼠IL-8）表达情况。（4）给予Aβ1-42脑内沉积模型大鼠腹腔注射CXCR2拮抗剂SB332235-Z,制作脑冰冻切片,免疫荧光检测T淋巴细胞数。3、探讨Aβ反应性小胶质细胞TNF-α在CXCR2/IL-8介导的T细胞跨内皮迁移过程中的作用（1）ELISA检测Aβ作用的BV2及U937培养上清中了NF-α水平。（2）使用TNF-α中和抗体处理经Aβ刺激的BV2上清,作用HBMECs后,ELISA检测IL-8水平。（3）在rhTNF-α及Aβ反应性的BV2介导的黏附和迁移实验中,使用CXCR2、IL-8及了NF-α中和抗体进行封闭实验。（4）构建Aβ1-42脑内沉积动物模型,脑室内注射TNF-α拮抗剂Enbrel,Real-time PCR检测外周血T淋巴细胞CXCR2水平,免疫荧光检测脑微血管内皮细胞CINC-1表达情况以及脑切片T淋巴细胞数。结果1、AD患者外周血T淋巴细胞高表达CXCR2增强其穿过HBMEC单层能力（1）AD患者外周血T淋巴细胞CXCR2受体表达水平升高。（2）CXCR2中和抗体能够有效抑制T淋巴细胞跨内皮迁移。2、Aβ反应性小胶质细胞上调脑微血管内皮细胞IL-8表达,有助于CXCR2/IL-8介导的T淋巴细胞跨内皮迁移（1）Aβ刺激的BV2培养上清刺激可上调HBMECs IL-8表达水平。（2）使用IL-8中和抗体及siRNA干扰HBMECs IL-8,能够抑制AD患者T淋巴细胞及Jurkat CXCR2/IL-8依赖的迁移及黏附。（3）脑内沉积的模型动物中Aβ1-42沉积能够诱导外周血T淋巴细胞CXCR2和脑微血管内皮细胞上CINC-1表达升高,最终引起外周血T细胞CXCR2依赖性穿过血脑屏障。3、Aβ反应性小胶质细胞TNF-α能够诱导T细胞CXCR2/IL-8介导的跨内皮迁移（1）Aβ1-42可上调小胶质细胞TNF-α表达,并引起HBMECs IL-8表达增加。（2）TNF-α中和抗体能够抑制Aβ1-42反应性小胶质细胞介导的T淋巴细胞迁移;TNF-α引发的T淋巴细胞迁移可被CXCR2或IL-8中和抗体拮抗。（3）TNF-α拮抗剂Enbrel可下降脑内Aβ1-42脑内沉积大鼠外周血T淋巴细胞CXCR2及脑微血管内皮细胞CINC-1表达,并抑制T淋巴细胞的跨血脑屏障迁移。结论AD患者脑内Aβ沉积刺激小胶质细胞产生TNF-α,并通过TNF-α促进脑微血管内皮细胞IL-8分泌及外周血T淋巴细胞CXCR2表达。T淋巴细胞通过高表达的CXCR2受体与脑微血管内皮细胞IL-8相作用,增强T淋巴细胞与脑微血管内皮细胞的黏附,进而促进T淋巴细胞穿过血脑屏障。