目的：在对临床分离的奶牛结核分支杆菌进行药敏分析的基础上，进一步应用分子生物学手段检测耐药基因，在分子水平上探讨奶牛结核分支杆菌分子耐药机制的发生、发展及其变异规律。　　 方法：利用建立的噬菌体生物扩增法对宁夏地区奶牛结核分支杆菌临床分离株、诱导菌株的耐药性进行表型检测；应用分子生物学方法对耐药基因进行序列分析，确认本地区奶牛结核分支杆菌耐药性及多重耐药性的产生情况与rpsL基因、rpoB基因、katG基因的关系，并与人源结核分支杆菌分子耐药性进行对比分析；采用人工诱导法诱导牛结核分支杆菌标准株对链霉素产生耐药性，应刚PCR-DS方法对诱导耐约菌株的基因突变进行检测。　　 结果；建立并优化了奶牛结核分支杆菌耐药性表型检测方法—噬菌体生物扩增法；应用该方法对奶牛结核分支杆菌临床分离株进行耐药性检测，并与绝对浓度法检测结果对比，从25株临床分离株中筛选出14株耐约菌株，其中12株为单耐链霉素、利福平、异烟肼菌株，2株为同时耐利福平和异烟肼的多重耐约株；采刚PCR-DS方法对25株临床分离株进行测序分析，12株单耐药分离株在rpsL，rpoB、katG基因上发生了碱基突变，其中5株耐链霉素菌株的rpsL基因在43位点发生碱基突变。5株耐利福平菌株的rpoB基因在531位点、526位点、511位点发生碱基定点突变。2株耐异烟肼菌株，其中1株在katG基因315位点发生碱基突变，1株在463位点发生碱基突变。2株多重耐药株的rpoB基因和katG基因同时发生了碱基突变，突变位点为rpoB基因的531、511位点，katG基因的315位点；人工诱导牛结核分支杆菌标准株PCR-DS分析有2株诱导菌株在rpsL基因的88位点发生碱基突变。