发光细菌活性调控及毒性检测研究

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目的水生生物是评价环境污染物毒性及其健康风险的重要手段,通常采用鱼、溞、藻和微生物作为指示生物,其中以发光细菌为代表的微生物方法相对简便、快速和经济。然而,发光细菌活性的稳定性是影响检测质量的重要问题。目前,可用方法有冷冻干燥法、连续培养法和细胞固定化技术。为了提高发光细菌毒性测定方法的稳定性和灵敏度,本文研究发光细菌生物活性调控方法,为发光细菌在线应用等提供支持。本文还采用发光细菌对水源水和景观水进行长期综合毒性评价,探讨实际水体的环境毒性基线。方法实验选择常用的指示生物明亮发光杆菌和鳆鱼发光杆菌为研究对象,研究真空冷冻干燥法制备冻干粉菌制剂的方法,通过发光细菌复苏后活性的分析,探讨冷冻过程中各种保护剂对发光细菌活性的影响。其次,研究5℃冷藏过程中发光细菌活性变化规律,通过比较各种冷藏复苏方式的效果,优化菌悬液添加剂配方。本文还比较NaCl、蔗糖等不同渗透压调节液的情况下,发光细菌对Zn2+(ZnSO4·7H2O)、Cr6+(K2Cr2O7)和3,5-二氯苯酚急性毒性检测结果的差异。同时,也研究有机助溶剂在发光细菌检测难溶性有机毒性物质时的效应。在上述基础上,检测两类水体水质毒性,采用统计分析方法构建上述水体毒性基线。结果冻干粉制备实验结果显示脱脂牛奶和糖醇类对发光细菌有很好的保藏效果,以1%NaCl、15%脱脂牛奶和6%蔗糖效果较佳。选用脱脂牛奶菌悬液冷藏复苏方法对明亮发光杆菌和鳆鱼发光杆菌进行冷藏,7天后复苏相对发光率约为92%。优于新鲜菌液冷藏和冻干粉即时复苏冷藏(冷藏4天复苏相对发光率小于60%)。蔗糖对发光细菌检测重金属的灵敏度有所提高,降低了对有机物检测的灵敏度。以DMSO和乙醇对发光细菌生物毒性效应EC10所对应的浓度为投加的限量,所测得氯苯和正己烷的EC50值分别为0.047mg.L-1,0.050mg.L-1,不投加DMSO或乙醇时,氯苯和正己烷的EC50值分别为0.037mg.L-1,0.048mg.L-1。饮用水源水毒性基线为99.4%103.8%,预警限为91%;景观水毒性基线96.0%102.1%,预警限为84%。结论NaCl、脱脂牛奶和蔗糖构成的复合保护剂提高发光细菌冻干粉保存时间,同时脱脂牛奶也能提高发光细菌悬液冷藏时的稳定性。NaCl和蔗糖的复合渗透压调节液可以提高发光细菌对重金属的灵敏度。DSMO和乙醇助溶剂对提高氯苯或正己烷的检测限作用甚小。研究表明,饮用水源水毒性基线为99.4%?103.8%,景观水毒性基线96.0%?102.1%。表明发光细菌方法可以用于毒性基线的构建。
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