三种蕨类植物的组织培养与遗传转化体系的研究

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本文以扇叶铁线蕨(Adiantum flabellulatum)孢子为材料,研究了不同外源物质(BA、IAA、GA3、GA4+7、Ca2+)对扇叶铁线蕨配子体发育及性器官分化的影响;以鹿角蕨(Platycerium wallichii)幼嫩叶片为材料,研究了3种细胞生长素(IBA、NAA、2,4-D)和3种细胞分裂素(BA, ZT, KT)对鹿角蕨叶片生长和分化的影响;以荷叶铁线蕨(Adiantum reniforme var. sinense)带芽点原叶体、GGB和鹿角蕨GGB为转化受体材料,对荷叶铁线蕨和鹿角蕨的遗传转化体系进行了探索,主要结果如下:1.扇叶铁线蕨孢子萌发的最优培养基为1/4MS+1.0 mg/L IAA,0.1 mg/L BA、IAA、GA4+7和3.0 mg/L GA4+7会抑制孢子的萌发。GA3、Ca2+和0.5 mg/L BA可有效促进扇叶铁线蕨配子体发育为心形体,各处理之间无显著差异。IAA、GA4+7和0.1、1.0 mg/L BA更易使配子体停留在丝状体阶段。IAA、GA3、Ca2+及0.5 mg/LBA均可不同程度地促进扇叶铁线蕨分生区的形成及颈卵器的分化,1.0 mg/L GA3的促进效果最好。GA4+7对分生区形成无明显作用,但可明显促进颈卵器的分化。2.诱导鹿角蕨GGB分化的最有效激素为0.5 mg/L BA, NAA与2,4-D对GGB的形成无作用,适量的ZT、KT、IBA可在一定程度上促进GGB的形成。诱导鹿角蕨芽苗分化的最优激素为0.5 mg/L NAA,分化率为89.58%,其次为0.5 mg/L ZT,二者之间无明显差异。适量的KT、IBA、2,4-D对芽苗的分化有促进作用,BA则严重抑制芽的分化。只有IBA与2,4-D能够诱导鹿角蕨愈伤的分化,5.0 mg/L IBA的愈伤诱导率最高,且显著高于2,4-D的处理。但形成的愈伤活力不能保持,最后都褐化死亡。3.初步确定荷叶铁线蕨的遗传转化体系为:将带芽点原叶体和GGB分别在MS+Ca2+ 0.2 mg/L和MS+ZT 1.0 mg/L培养基上预培养3 d,用OD600值为0.5~0.8的农杆菌菌液侵染10 min,于黑暗中共培养3 d;在含500 mg/L Cef的培养基上延迟培养,原叶体15d, GGB 30d;用添加100 mg/L Kan和500 mg/L Cef的培养基进行筛选培养。4.初步确定鹿角蕨的遗传转化体系为:以在MS+ZT 0.5 mg/L培养基上预培养3 d的GGB为材料,用OD600值为0.5~0.8的农杆菌菌液侵染10 min,于黑暗中共培养3 d;在含200 mg/L Cef的培养基上延迟培养30 d;用添加300 mg/L Kan和200mg/L Cef的培养基进行筛选培养。
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