目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种原因不明、以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化的疾病。主要表现为进行性加重的呼吸困难,伴限制性通气功能障碍和气体交换障碍。西医目前对此病治疗方法单一,疗效欠佳。近年来关于中医药治疗IPF的研究逐渐深入,本研究通过回顾性研究分析我院IPF患者的住院病历,探讨其临床资料规律,并总结导师治疗IPF的理论思想,以及补肾益肺消癥法治疗该疾病的临床经验。现代研究显示肺泡表面活性蛋白(surfactantprotein,SP)-C表达和分布异常诱导内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)是IPF的关键病理改变。本研究探讨补肾益肺消癥方对肺纤维化大鼠的超微结构和SP-C表达的影响,及其对转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导 A549 细胞上皮-间质细胞转化(epithelial to mesenchymal cell transition,EMT)过程中 SP-C 表达和分布的影响,探究补肾益肺消癥方干预ERS的作用机制,为临床上应用补肾益肺消癥法治疗肺纤维化提供新的依据。方法1.采用回顾性研究的方法,收集2010年1月-2016年8月收入我院呼吸科病房诊断为IPF的患者病历,根据预先设计的《IPF临床资料观察表》收集相关内容,包括一般人口学资料、临床症状、体征及客观临床指标,采集患者中医证候信息,通过统计分析,探讨IPF患者临床及证候学特点。另整理导师治疗IPF的验案,探讨"肺络微型癥瘕"理论渊源。2.动物实验以博莱霉素(bleomycin,BLM)致肺纤维化大鼠模型,补肾益肺消癥方干预,分组情况为:正常组、模型组、阳性对照组(吡非尼酮)、中药预防组、中药治疗组、中药防治组,电镜下观察大鼠病变肺组织超微结构的改变,免疫组化法观察肺泡表面活性蛋白SP-C表达的改变。3.体外实验中,采用TGF-β1(5ng/ml)刺激A549细胞发生EMT为细胞模型,分组情况为:正常组、TGF-β1组、TGF-β1抑制剂组(2μmol/L)、冻干粉1组(100μg/ml)、冻干粉2组(200μg/ml)。通过药物干预,利用免疫荧光技术观察A549细胞形态的改变和EMT标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)在细胞上的不同表达,激光共聚焦显微镜下检测细胞内SP-C的表达。结果1.IPF临床相关数据分析结果收集28例符合诊断标准的IPF病历,男性16例(57.1%),女性12例(42.9%);病程在1-5年的患者20例(71.4%),6-10年的患者6例(21.4%),其中住院治疗8-14天的患者15例(53.6%),1-7天的患者5例(17.9%);患者在入院前接受的主要治疗项目中应用化痰药及抗感染药所占比例最大,皆为13 例(46.4%);联合发病疾病谱中以肺部感染为首,共18例(64.3%),其次为COPD/慢性支气管炎14例(50.0%)、冠心病12例(42.9%),胃食管反流7例(25%);IPF患者吸烟人群中男性12例(85.2%),女性2例(14.3%),男性比例明显高于女性;2例(7.1%)具有IPF家族遗传史;常见临床症状中出现咳嗽28例(100%),其次是咳痰27例(96.4%),其余症状按照比例依次为胸闷憋气24例(85.7%)、喘息23例(82.1%)、气短15例(53.6%)和劳力性呼吸困难14例(50.0%);纳入的IPF患者HRCT示,IPF终末阶段的CT典型表现"蜂窝肺"共14例(50.0%)所占比例最大,其次是网格影12例(42.9%),磨玻璃影2例(7.1%);IPF患者凝血功能异常,D-二聚体升高12例(48%),纤维蛋白原增加7例(28%),机体多处于高凝状态;IPF与肿瘤标记物的升高有一定的相关性,其中CEA升高占75%,细胞角蛋白19片段占75%,CA199占50.0%,CA125占37.5%,特异性烯醇化酶占37.5%,CA153占31.3%,铁蛋白占18.8%;IPF患者证候分布单证中,按比例依次为:气虚证23例(82.1%)、血瘀证19例(67.9%)、痰热证15例(53.6%)、阴虚证15例(53.6%),在两证组合中,前两类分别为气虚血瘀证(16.3%)和气阴两虚证(14.1%),在三证组合中按照比例气虚阴虚血瘀证(20.5%)和气虚血瘀痰浊证(20.5%)所占比例最高。2.动物实验示:补肾益肺消癥方可以减少IPF大鼠肺泡上皮细胞内质网扩张、扭曲现象,减少SP-C异常堆积。3.体外实验中,补肾益肺消癥方可以减少α-SMA在细胞的表达。免疫荧光显示:α-SMA在TGF-β1抑制剂组表达较TGF-β1组降低,P<0.01,统计学分析具有显著性差异。中药水提物冻干粉各组均可以降低α-SMA的表达,其中100μg/ml冻干粉1组效果最优。SP-C在细胞表面的表达结果显示:中药冻干粉2组SP-C表达较模型组及TGF-β1抑制剂组降低,P>0.05,结果无统计学差异;流式细胞仪检测细胞凋亡率,TGF-β1组凋亡率较正常组增高,TGF-β1抑制剂组及冻干粉1组凋亡率较模型组减少,P<0.01。结论1.参照《特发性肺纤维化诊断和治疗中国专家共识》,纳入的IPF患者临床表现特征符合流行病学观察结果,肿瘤标志物及凝血功能异常与IPF存在相关性,中医证候以"虚、瘀、痰"为主,导师在长期的临床过程中发现"肺络微型癥瘕"可以阐释本病的病理机制,本研究可以为该理论提供新的数据支持。2.补肾益肺消癥方可以通过干预ERS,调节SP-C在细胞表面的表达,减少肺泡上皮细胞凋亡,干预EMT过程,延缓IPF病理进程。