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目的:评价不同方法对用于多重耐药菌感染患者十二指肠镜的消毒效果,并监测消毒后的细菌对消毒剂的抗性水平及耐消毒剂基因携带情况,分析用于多重耐药菌感染患者的十二指肠镜消毒不彻底的原因,以期使消毒更为安全、有效。方法:（一）评价不同方法对多重耐药菌感染患者使用十二指肠镜的消毒效果1.收集160条江西省某三甲医院内镜中心多重耐药菌感染患者使用的十二指肠镜,随机分为4组,每组40条,分别为戊二醛消毒组（A组）、过氧乙酸消毒组（B组）、重复戊二醛消毒组（C组）和环氧乙烷消毒组（D组）;2.对4组消毒后十二指肠镜的活检腔道、水气腔道及抬钳器腔道等3个部位进行现场采样,重复采样3次,共获得1440个样本,进行微生物检测,比较4组微生物检出结果;3.采用全自动微生物分析系统对消毒后检测出的细菌进行菌种鉴定,对检出率最高的细菌进行药敏试验检测其耐药性。（二）检测多重耐药铜绿假单胞菌消毒剂抗性水平及耐消毒剂基因携带情况1.采取最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）实验检测多重耐药铜绿假单胞菌株对2.4%戊二醛和0.24%过氧乙酸两种消毒剂的抗性水平;2.设计引物,使用琼脂凝胶电泳和聚合酶链反应检测多重耐药铜绿假单胞菌株中是否存在以下5种耐消毒剂基因:qac A/B、qac C/D、qac E、qac ED1、及qac ED1-sul1。结果:（一）不同方法对用于多重耐药菌感染患者的十二指肠镜的消毒效果1.微生物检测结果:本次研究共采集160条十二指肠镜,分为4组,每组40条,每条十二指肠镜有3条管腔,重复试验3次,共收集到1440份样本。A组、B组、C组和D组十二指肠镜管腔总阳性条数分别为78条、36条、60条和0条,4组间差异具有统计学意义（c~2=89.191,P=0.000）。A、B、C和D四组总检出率分别为32.5%、27.5%、27.5%和0%,四组之间检出率差异具有统计学意义（c~2=38.657,P=0.000）。微生物检测菌落中位数和四分位数结果:在活检腔道,A组菌落计数为0（0,1）,其余3组菌落计数均为0（0,0）,4组间差异具有统计学意义（H活=15.687,P=0.001）。在水气腔道,A组为0（0,0.75）,其余3组菌落计数均为0（0,0）,4组间菌落计数差异具有统计学意义（H水=11.604,P=0.009）。在抬钳器腔道,A组菌落计数为0（0,2.5）,B组和C组均菌落计数为0（0,1）,D组为0（0,0）,4组间菌落计数差异具有统计学意义（H抬=15.371,P=0.009）。2.细菌鉴定和药敏试验结果:本研究从1440个共分离到97株病原菌,检出10类病原菌,检出率为6.7%,多重耐药铜绿假单胞菌的病原菌检出率居于首位。（二）多重耐药铜绿假单胞菌消毒剂抗性水平及耐消毒剂基因携带情况1.标准铜绿假单胞菌ATCC 27853对戊二醛的MIC和MBC值均为10000mg/L。37株多重耐药铜绿假单胞菌对戊二醛MIC值范围是10000～24000mg/L,中位数为24000mg/L,四分位间距为6000mg/L;37株多重耐药铜绿假单胞菌对戊二醛MBC值范围是12000～24000mg/L,中位数为24000mg/L,四分位间距为0mg/L。2组MIC和MBC进行比较差异有统计学意义（Z=-2.808,P=0.005）。标准菌株对过氧乙酸的MIC和MBC值均为500mg/L。37株多重耐药铜绿假单胞菌对过氧乙酸的MIC值范围为200～800mg/L,平均数为500mg/L,标准差为188.56mg/L;37株多重耐药铜绿假单胞菌对过氧乙酸的MBC值范围为200～800mg/L,平均数为597.30 mg/L,标准差为172.38mg/L。2组MIC和MBC值进行比较差异有统计学意义（Z=-2.209,P=0.027）。2.以标准菌株的MIC值为抗性标准,对戊二醛产生抗性的多重耐药铜绿假单胞菌有36株,抗性率为97.30%;对过氧乙酸产生抗性的多重耐药铜绿假单胞菌有13株,抗性率为35.13%。多重耐药铜绿假单胞菌对戊二醛的抗性高于过氧乙酸（c~2=31.956,P=0.000）。以标准菌株MBC值为抗性标准,对戊二醛产生抗性的多重耐药铜绿假单胞菌有37株,抗性率为100%,对过氧乙酸产生抗性的多重耐药铜绿假单胞菌有26株,抗性率为70.27%,多重耐药铜绿假单胞菌对戊二醛的抗性高于过氧乙酸（c~2=12.921,P=0.000）。3.耐消毒剂基因检出情况:37株多重耐药铜绿假单胞菌中qac C/D耐消毒剂基因携带率为72.9%、qac ED1-sul1耐消毒剂基因携带率为54.05%,携带qac C/D+qac ED1-sul1基因的菌株的占40.54%,未携带qac A/B、qac E、qac ED1耐消毒剂基因。结论:1.4种消毒方法的效果比较,环氧乙烷>过氧乙酸>戊二醛重复消毒>戊二醛,十二指肠镜抬钳器腔道消毒难度大。2.MDR-PA位于多重耐药菌感染患者使用的十二指肠镜经消毒后病原菌检出率的首位。3.MDR-PA对2.4%戊二醛抗性率较高,不推荐使用戊二醛对多重耐药菌感染患者的十二指肠镜消毒处理。MDR-PA对0.24%过氧乙酸也有抗性,在临床工作中需注意过氧乙酸的抗性问题。4.qac C/D、qac ED1-sul1耐消毒剂基因是用于多重耐药菌感染患者使用的十二指肠镜经消毒后细菌检出率较高的重要原因。