论文部分内容阅读
背景：肿瘤干细胞研究的前提和基础是能够分离并培养相应肿瘤类型的干细胞或干细胞样细胞。由于肿瘤干细胞的分子标志物还不精确以及人为因素的干扰都为肿瘤干细胞的分离鉴定提出了更高的要求。目前胃癌干细胞(cancer stem cell, CSC)的分离和鉴定仍十分困难,因为这一小部分的胃癌CSC和占大多数的非致瘤性肿瘤细胞在形态上难以区别。常规的实验流程由于对实体瘤采用了蛋白酶消化、机械分离等复杂的步骤,破坏了癌细胞生长的原始微环境。因此,努力找到一种自然病理状态下的胃癌干细胞将有重大意义。目的：先从人胃腺癌细胞系AGS中分离CD44+细胞并体外培养。探讨CD44+细胞是否具有肿瘤干细胞特性。再探讨从腹腔灌洗液中分离胃癌干细胞的可行性及其意义。方法：第一部分首先用磁激活细胞分选法(MACS)从人胃癌细胞系AGS中分选CD44+细胞,再采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养,通过传代更新、交替在含血清/无血清培养液中培养等方法鉴定悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。第二部分随机选择45例胃癌患者,术中发现有腹膜转移8例,无腹膜转移37例。用流式细胞仪及免疫组化检测胃癌组织、腹膜转移灶中CD44及CD44V6的表达。同时流式细胞仪检测胃癌术中腹腔灌洗液中CD44和CK20的表达,并比较有、无腹膜转移两组之间差别是否有显著性。结果：(1)MACS分选CD44+细胞纯度达99.2%。(2)CD44+细胞在SFM中悬浮成球率为31%,而CD44-细胞不能成球。CD44+成球细胞还可以继续传代,在完全培养液中培养可分化成CD44-细胞。(3)流式细胞结果：CD44在胃癌组织中的阳性表达率为36.9%,胃癌组织中CD44阳性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关；该两因素分组间差异有显著性(P=0.00)。免疫组化结果：CD44V6在胃癌组织中的阳性表达率为40%,胃癌组织中CD44V6阳性表达率与浆膜浸润、淋巴结转移等病理因素有关；该两因素分组间差异有显著性(P<0.05)。(4)CD44在胃癌和腹膜转移灶中的表达无差异,(P>0.05)。(5)有、无腹膜转移组之间腹腔灌洗液中CD44+CK20+差异有统计学意义(P=0.000)结论：(1) MACS可以快捷、方便地分选肿瘤细胞,而且分选后的细胞纯度高,可以立即用于细胞培养。(2)从人胃腺癌细胞系AGS中分离的CD44+细胞具有肿瘤干细胞特性,CD44可以作为胃癌干细胞标志物之一。(3)人胃癌组织可能包含胃癌干细胞,并导致腹膜转移,(4)从胃癌腹腔灌洗液游离癌细胞中分离胃癌干细胞是可行的,这种可行性为人胃癌干细胞的分离提供了新的思路,为制定胃癌腹膜转移的靶向治疗提供了一定的实验基础。