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缩泉丸出自《妇人良方》,由乌药、益智仁、山药组成,具有温化肾气,缩尿止遗的功效。临床上主治膀胱虚寒证,尿量增多,小便频数,或遗尿不止。其功效可概括为“补肾缩尿”,补肾治其本,缩尿缓其标。对待这样一个有效的小方,不论复方,还是组方中乌药、益智仁、山药这三个单味药,补肾(针对肾阳虚证)缩尿(针对肾脏损害所致尿量过多的病理生理变化)方面的研究也几乎是一片空白,这与中医临床上无论是缩泉丸还是补肾缩尿理论的广泛应用不相称,本文在腺嘌呤致肾阳虚多尿的动物模型基础上,选择水通道蛋白2(AQP-2)、尿中代谢物及离子浓度以及血中醛固酮(ALD)、环磷酸腺苷(cAMP)浓度等引起尿量过多的内在病理生理变化和免疫功能等肾阳虚证的病理表现为研究对象,观察缩泉丸补肾缩尿的机理。本论文首先建立了腺嘌呤致肾阳虚多尿实验模型,经反复实验证实,文献报道的饲料喂饲法造模效果不理想,改用定量灌胃法后,造模效果稳定,且生化和病理改变重复性好,并且摸索出动物能出现肾阳虚的症状又在一定时间段内不出现死亡的剂量,证实腺嘌呤按250mg/kg灌服大鼠一个月是比较理想的剂量:动物多尿明显,出现畏寒肢冷,倦缩拱背,体重减轻,活动减少,反应迟钝,弓背蜷缩,喜扎堆,畏寒喜暖;体毛枯疏,失去光泽,竖毛,阴囊皱缩,睾丸回升等肾阳虚的表现,是一种较为理想的“肾阳虚多尿”动物模型。且缩泉丸对于此模型具有明显的缩尿和改善肾阳虚的作用。本论文从以下几个方面探讨缩泉丸的药理作用机制:1.缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠尿量的影响;2.用实时荧光定量PCR法观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏水通道蛋白AQP-2 mRNA及加压素二型受体(AVPR—V2)mRNA的表达的影响;3.用免疫组化法观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠水通道蛋白AQP-2及AVPR—V2在肾脏表达的影响,了解其在肾脏的定位;4.用Westemblot方法观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏水通道蛋白AQP-2及AVPR—V2蛋白表达的影响;5.HE染色观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏病理改变的影响;6.放免法测定血中ALD和cAMP的含量,观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠血中ALD和cAMP的含量的影响;7.生化仪测定尿中BUN、Cr、钠、钾和氯离子的浓度,观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠尿BUN、Cr、钠、钾和氯离子排泄的影响;8.流式细胞仪测定血中CD3/CD4/CD8的含量,观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠血CD3/CD4/CD8的含量的影响,观察缩泉丸的补肾作用;9.观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠体重及脏器系数的影响。实验结果表明缩泉丸可以减少尿量;提高肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AQP-2mRNA和AVPR—V2mRNA表达;缩泉丸可以增强肾阳虚多尿模型大鼠肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP-2的表达、可以增强肾阳虚多尿模型大鼠肾小球、集合管、肾小管和肾小囊的内壁细胞上胞浆AVPR—V2的表达;缩泉丸可以增加肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AQP-2和AVPR—V2蛋白表达;缩泉丸可以改善肾阳虚多尿模型大鼠肾脏的病理改变,使肾小囊腔和肾小管腔的棕黄色结晶沉积、炎性细胞浸润减少等;缩泉丸可以提高肾阳虚多尿模型大鼠血cAMP和ALD含量;缩泉丸能增加肾阳虚多尿模型大鼠尿钾排出量、降低尿钠和氯排出量;缩泉丸能增加肾阳虚多尿模型外周血CD3~+、CD3~+CD4~+百分比,减少CD3~+CD8~+百分比;缩泉丸能增加肾阳虚多尿模型体重,使胸腺、肾上腺和垂体系数增加。本论文从三个方面探讨了缩泉丸的药理作用机制:一是缩泉丸对肾水通道蛋白AQP-2及AVPR—V2的表达与定位的影响,证实缩泉丸可以调节AQP-2在肾脏的表达与分布,从水平衡调节的角度推阐了缩泉丸的作用机制;二是缩泉丸对肾阳虚多尿机体水平衡紊乱如尿中代谢物及离子浓度的影响以及血中ALD浓度的影响,证实缩泉丸可以改善机体尿量过多的内在病理生理变化;三是观察缩泉丸改善肾阳虚时机体低下的免疫功能和脏器系数,说明缩泉丸作用的整体调节性和多靶性。