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目的:探讨小鼠胚胎干细胞(ES细胞)提取液对兔旁中央角膜上皮细胞再程序化的诱导作用。
方法:将经过不耐氧链球菌溶血素(streptolysin-O,SLO)膜渗透化处理过的原代兔旁中央角膜上皮细胞暴露于小鼠ES细胞提取液中15min,经CaCl2膜恢复后传代培养。分别以未处理细胞及暴露于上皮细胞提取液后的细胞作为对照组。倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期改变;挑取克隆进行细胞传代扩增后,行RT-PCR和荧光免疫组织化学染色检测Oct4、SSEA1、K3、P63、ABCG2等蛋白的表达变化;行染色体进行核型分析,观察细胞核型的变化:并行碱性磷酸酶(AKP)染色和成瘤性分析等胚胎干细胞特性检测。
结果:ES细胞提取液能促使兔角膜上皮细胞发生再程序化,获得胚胎干细胞的生物学特性,包括克隆样生长、AKP染色阳性、具有多向分化潜能等;表达Oct4、SSEA1等胚胎干细胞标志蛋白。但随着传代的增加,细胞的克隆逐渐变得扁平,细胞恢复表达角膜缘干细胞标志蛋白。
结论:ES细胞提取液能成功的诱导近终末分化的旁中央角膜上皮细胞发生再程序化,转变为类胚胎干细胞养细胞,但这种转变是不完全的,细胞仍部分保有其来源细胞的特性,具有恢复其来源细胞特性的倾向。