前期的研究工作表明,Utrophin(UTRN)是一个候选的抑癌基因,它在乳腺癌、肾癌、肝癌等多种肿瘤中表达明显下调或缺失。为了进一步研究UTRN在肺癌细胞系的表达和定位情况,本研究利用半定量RT-PCR方法检测了UTRN的表达,结果表明在15种肺癌细胞系中UTRN呈不同程度的表达下调,其中4种存在UTRN cDNA 7909bp-10277bp处的表达缺失,6种在此区域表达明显下降。同时应用Western blotting技术,对UTRN蛋白进行了定位分析,结果发现UTRN在肺癌细胞系A549、AGZY-83a和Anip973的细胞核中存在约130 kD的截短蛋白(全长UTRN蛋白约为395 kD)。此外,应用免疫荧光技术,与人胚肺细胞MRC-5比较,在肺癌细胞系A549中可见细胞核区域存在UTRN的表达。综合分析以上研究结果,提示UTRN在肺癌细胞中不仅仅是表达缺失或表达降低,还存在着UTRN蛋白的转位和截短。为了进一步明确UTRN基因对细胞增殖和细胞骨架的影响,本实验以易转化、间变型小鼠成纤维细胞NIH3T3为材料,采用RNAi技术进行UTRN基因的表达沉默分析。通过绘制细胞增殖曲线和鬼笔环肽荧光染色方法,发现UTRN基因表达沉默后,与对照组比较,细胞增殖速度明显增加;微丝细胞骨架数量明显减少、结构紊乱,且细胞表面出现丝足。这些结果与我们前期以人胚肾HEK293细胞为材料进行的RNA干扰实验结果相一致。以上实验数据进一步揭示了UTRN基因作为抑癌基因在细胞内行使功能,为深入探讨UTRN与肿瘤发生的关系提供了新的思路。